[发明专利]转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测引物对、检测探针和试剂盒，以及它们在转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测中的应用。本发明还公开了一种转基因抗虫玉米GAB‑3转化体的定量PCR检测方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中转基因植物的分子生物学检测方法，特别是涉及转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测方法，以及相关的引物对、探针和试剂盒。

背景技术

近年来，随着基因工程技术的飞速发展，转基因作物种植面积和转基因作物品种都大量增加，同时转基因植物及其产品安全性也引起全球范围内的关注和担忧。为了有效监管转基因植物及其产品，保障消费者的合法权益，目前，包括中国在内的全世界50多个国家颁布并实施了转基因生物安全标识制度和配套的管理规定。中国的基因工程育种技术发展迅速，近年来育成了一系列的转基因品种作物，因此制定相关的转基因生物安全评价方法显得尤其重要。

在转基因作物及其产品安全检测方法中，PCR技术以其灵敏度高、稳定性好、准确性强、操作简便成为国际上转基因植物及其产品检测的主要方法，中国近年来颁布的转基因生物及其产品安全评价方法也是以PCR检测方法为主。根据检测目的基因的不同，PCR检测方法分为筛查、基因特异性、构建特异性和转化体特异性检测；其中，转化体特异性检测方法的特异性最高，筛查检测和转化体特异性检测方法是实际检测中应用最广泛的方法。筛查检测方法主要用于初步检测样品中是否含有转基因成分，转化体特异性检测方法可以准确确定转基因植物的身份。

转基因抗虫玉米GAB-3是由杭州瑞丰生物科技有限公司和浙江大学联合研发的转基因抗虫玉米。该转化体于2008年利用农杆菌介导法转化栽培玉米品系Hi-II中获得的，转基因抗虫玉米GAB-3产生Cry1Ab和Cry2Ab两种杀虫蛋白，对玉米螟、棉铃虫及黏虫高抗，可以满足玉米种植者对鳞翅目害虫的有效地防治。2012年5月在农业农村部备案开展了中间试验(农基安办字2012-T088)，2015年获得批准在浙江省开展环境释放试验(农基安审字(2014)第005号)，2019年获得批准在浙江省开展生产性试验(农基安审字(2019)第033号)。经过连续多年多点的安全性评价研究，转基因抗虫玉米GAB-3的分子特征、环境安全性和食用安全性已十分明确。

在分子特征方面，转基因抗虫玉米GAB-3的目的基因和标记基因以单位点单拷贝的方式插入在第7号染色体上，实际插入序列全长为11064bp，T-DNA中其余各元件均保持完整，并且与转化质粒中T-DNA序列完全一致。目的基因cry1Ab、cry2Ab和标记基因g10evo-epsps在不同世代之间整合、表达稳定。

到目前为止，中国尚未发布专门针对转基因抗虫玉米GAB-3转化体及其衍生品种检测的方法，迫切需要尽快制定相关检测方法，为中国转基因生物安全管理部门实施各项安全管理制度提供科学方法和技术支撑。

发明内容

为此，本发明的一个目的是提供一种转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测引物对，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

本发明的另一个目的是提供一种转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测探针，其序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明的另一个目的是提供一种转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测试剂盒，其中包括上述的定量PCR检测引物对和/或定量PCR检测探针。

本发明的另一个目的是提供上述的定量PCR检测引物对和/或定量PCR检测探针在转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测中的应用。

本发明的另一个目的是提供上述的定量PCR检测试剂盒在转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测中的应用。

本发明的另一个目的是提供一种转基因抗虫玉米GAB-3转化体的定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：