[发明专利]一种食物中红霉素残留检测方法

权利要求书

1.一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、红霉素试剂盒准备：采用96孔聚苯乙烯试剂板作为固相载体，放入真空铝箔袋内，在试剂盒酶标板微孔中预包被红霉素偶联抗原制成检测板，以塑料硬膜为盖板膜，另外包含30mμL浓缩洗涤液、5mμL样品提取液A、样品提取液B、12mμL酶标二抗、6mμL红霉素抗体工作液、12mμL显色液TMB、12mμL终止液和6瓶1mμL不同浓度的红霉素标准品溶液及1瓶1mμL高浓度标准品溶液，试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在泡沫塑料模具中与检测板、盖板膜一同封装在盒内，以便于携带和运输；

步骤二、1x洗液的制备：

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合检测：

①加入50μL的标准液或样品于所设定的孔中；

②在每孔中加入50μL酶标二抗，再在每孔中加50μL一抗体工作液；轻敲微孔板边缘混匀60秒；

③室温(20-25℃)孵育30分钟；

④洗板4次，每次加入260μL 1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

⑤加入100μL的TMB底物，轻轻震板1分钟。

⑥在室温下避光孵育15分钟，加入50μL的终止液终止反应，在450nm下读OD值；

步骤三、结果计算：

①分别计算标准和样品的平均吸光度值和相对吸光度值；

②相对吸光度值(％)＝(标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)100％；

③以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数为横坐标建立标准曲线；

④从标准曲线上读取样品的浓度值。

2.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：步骤一所述试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项，准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用，准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中。

3.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述样品在检测前需要进行前处理，所述样品包括水样、组织样本和鲜奶，所述水样为1×PBS：1体积(10×PBS)：9体积(蒸馏水)水样，所述组织样本包括鸡肉、鸭肉、猪肉、猪肝、鱼虾等。

4.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应放置-20℃环境中，样品使用前恢复到室温。

5.根据权利要求3所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述水样的前处理具体步骤为：

①取2mμL水样，用酸或者碱调pH到6-7；

②取1.0mμL上述调好的水样加入3mμL30％甲醇/70％1X PBS；

③最大转速漩涡振荡1min；

④每孔取50μL上清进行检测；

稀释倍数：4。

6.根据权利要求3所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述组织样本的前处理具体步骤为：

①除去脂肪，匀质样品；

②称取1g的样品，加入2.9mμL30％甲醇/70％1X PBS，加入50μL样品提取液A，摇匀5秒后加入50μL样品提取液B，涡旋30秒；

③最大转速漩涡振荡3min；

④室温(22.5±2.5)℃、4000rpm离心5分钟；

⑤室温下4000xg离心4分钟；

⑥每孔取50μL上清进行检测；

稀释倍数：8。

7.根据权利要求3所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述鲜奶的前处理具体步骤为：

①取1.0mμL鲜奶样品加入50μL样品提取液A，摇匀5秒后加入50μL样品提取液B，涡旋30秒；

②最大速度涡旋30秒；

③4000xg在室温(20–25℃(68–77°F))离心5分钟；

④取上清50μL加350μL 30％甲醇/70％1X PBS，最大速度涡旋30秒；

⑤每孔取50μL上清进行检测；

稀释倍数：8.8。