[发明专利]一种食物中红霉素残留检测方法

说明书

本发明属于红霉素残留检测技术领域，公开了一种食物中红霉素残留检测方法，包括以下步骤：步骤一、红霉素试剂盒准备，采用96孔聚苯乙烯试剂板作为固相载体，放入真空铝箔袋内，在试剂盒酶标板微孔中预包被红霉素偶联抗原制成检测板，以塑料硬膜为盖板膜。本发明提供的红霉素残留检测试剂盒小巧轻便，便于携带和运输，且检测方法操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中红霉素含量的测定，减少了检验样本所需要的时间，可用于临床、药物、食品和环境等分析领域，且所需仪器较少，只需要酶标仪、匀质器、振荡器和微量加样器，普通实验室一般均有配备，所需成本较低。

技术领域

本发明涉及红霉素残留检测技术领域，具体为一种食物中红霉素残留检测方法。

背景技术

红霉素是由红霉素链霉菌产生的大环内酯系的代表性抗菌素。作用机制在于其主要与核糖核蛋白体的50s亚单位相结合，抑制肽酰基转移酶，影响核糖核蛋白体的移位过程，妨碍肽链增长，抑制细菌蛋白质的合成，是抑菌剂。

因此广泛应用于畜禽、水产养殖中的细菌性疾病的治疗和防治。由于红霉素在动物体内代谢时间较长，因此不可避免地在动物体内产生残留，给人畜带来危害。同时，红霉素经动物体代谢后大部分以母体化合物或代谢体的形式经动物粪便和尿液排出体外，进入环境介质。水中的沉积物是红霉素的主要富集场所，水生动植物(如水草、斑马鱼等)也对红霉素表现出一定的吸收富集能力，通过食物链被人体吸收后蓄积在肝、肾中，给人类带来毒副作用，如腹泻、恶心、呕吐、过敏反应等。虽然目前红霉素在环境水样中的最大残留限量没有明确规定，但我国农业部235号公告和欧盟CE1181/2002规定红霉素在动物组织中的最大残留限量为200ug/kg，另外美国规定猪可食性组织中的红霉素最高残留限量为100ug/kg，日本规定水生动物中红霉素最高残留限量为200ug/kg。

目前，红霉素残留检测主要应用高效液相色谱法(HPμLC)，气相色译法(GC)往往需要衍生化，增加了操作的繁琐性且灵敏度也不高，近年来，液相色谱-串取质谱法(μLC-IS/MS)用于红霉素的检测，虽然灵敏度较高，但仪器昂贵，前处理复杂及需要专业人员操作等因素也局限了其在现场检验，样品筛选中的应用。

发明内容

(一)解决的技术问题

1.要解决的技术问题

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种食物中红霉素残留检测方法，解决了上述问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种食物中红霉素残留检测方法，包括以下步骤：

步骤一、红霉素试剂盒准备：采用96孔聚苯乙烯试剂板作为固相载体，放入真空铝箔袋内，在试剂盒酶标板微孔中预包被红霉素偶联抗原制成检测板，以塑料硬膜为盖板膜，另外包含30mμL浓缩洗涤液、5mμL样品提取液A、样品提取液B、12mμL酶标二抗、6mμL红霉素抗体工作液、12mμL显色液TMB、12mμL终止液和6瓶1mμL不同浓度的红霉素标准品溶液及1瓶1mμL高浓度标准品溶液，试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在泡沫塑料模具中与检测板、盖板膜一同封装在盒内，以便于携带和运输；

步骤二、1x洗液的制备：

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合检测：

①加入50μL的标准液或样品于所设定的孔中；

②在每孔中加入50μL酶标二抗，再在每孔中加50μL一抗体工作液；轻敲微孔板边缘混匀60秒；

③室温(20-25℃)孵育30分钟；

④洗板4次，每次加入260μL1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；