[发明专利]利用连续流加液体深层发酵生产茶藨子叶状层菌的工艺

说明书

本发明涉及利用连续流加液体深层发酵生产茶藨子叶状层菌的工艺，包括将茶藨子叶状层菌菌粉接种于含有固体培养基的无菌平板上分离纯化，挑取单个菌落接种于含有麦麸汁的液体培养基中培养，再在液体培养基中扩大培养后接种于5L发酵罐中进行发酵生产。本发明提出茶藨子叶状层菌的连续流加液体深层发酵生产工艺，提高了茶藨子叶状层菌的产量，也提高了茶藨子叶状层菌中麦角甾醇等活性物质的含量，对提高茶藨子叶状层菌的产量和品质具有重要意义。

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，特别涉及利用连续流加液体深层发酵生产茶藨子叶状层菌的工艺。藨子叶状层菌又名金银花菌，英文名为：Phylloporia fibis(Schumanch.:Fr.)Ryvarden。

背景技术

茶藨子叶状层菌(Phylloporia ribis(Schumach.:Fr.)Ryvarden)，又名金银花菌，为寄生在忍冬科植物忍冬植株上的一种大型真菌。该菌主产于山东平邑，俗称“银花蛾子”，在当地用药历史悠久。该菌经过了长期的民间应用，发现其具有清热、止痛、解毒的功效，常被用来治疗咽喉炎和各种癌症。茶藨子叶状层菌中含有三萜类、多糖类、甾醇类、脂肪酸类等多种活性成分，具有消炎、增强免疫力和抗癌的作用，是与金银花作用相似的珍贵真菌药物资源。

近年来经过对茶藨子叶状层菌的开发利用，市场需要量非常大，人工培养的技术也得到了迅速发展。但固体培养子实体生长缓慢，难以大批量生产，本发明采用液体深层发酵技术批量生产茶藨子叶状层菌，到目前为止，食药用菌的液体深层发酵技术发展非常迅速，利用液体深层发酵技术生产食药用菌菌丝体，提取其中有效成分应用于医药工业取得了很大的发展。本发明生产茶藨子叶状层菌不仅可以提高产菌量，其中的活性成分含量也得到了大幅度提高，有利于该菌的大规模生产和开发利用。

发明内容

为了克服背景技术中固体培养子实体生长缓慢，难以大批量生产等问题，本发明提出茶藨子叶状层菌的连续流加液体深层发酵生产工艺，提高了茶藨子叶状层菌的产量，也提高了茶藨子叶状层菌中麦角甾醇等活性物质的含量，对提高茶藨子叶状层菌的产量和品质具有重要意义。

为了实现上述目的，本发明是按照以下方式实现的：

利用连续流加液体深层发酵生产茶藨子叶状层菌的工艺，包括菌粉划平板分离纯化-液体培养基培养-种子扩大培养-发酵罐发酵生产-菌丝体收集、干燥、活性成分检测和真空包装。

液体发酵培养基由以下物质按重量百分含量配制：蛋白胨2％，无水葡萄糖2.5％，KH₂PO₄0.05％,MgSO₄·7H₂O 0.025％，麦麸汁的体积百分含量为12.5％，余量为蒸馏水。培养基在121℃下进行高压灭菌20min。

用接种环无菌操作将少量菌粉接种于含有固体培养基无菌平板上，固体培养基格外添加2％的琼脂。发酵罐培养条件：装样量80％，通气量为1vvm，初始搅拌速度为100rpm，维持pH为6.0，温度29℃，培养12h时，提高转速至200rpm并培养至14h，再提高转速至400rpm，培养至36h时通过蠕动泵进行补料；培养48h时将转速提高至800rpm，直至培养96h发酵结束。其中每隔12h取样1次，每次取2份，每份25mL，进行发酵液中生物量和葡萄糖含量的检测。中途补料成分为600mL麦麸汁中加入120g无水葡萄糖和96g蛋白胨，在121℃下进行高压灭菌20min，于超净工作台中冷却至室温后倒入发酵罐的补料瓶中，通过蠕动泵以0.25mL/min的速度进行补料。

发酵结束时通过收集到的干菌量反映最终生物量可达25.45g/L。

本发明方法对发酵生产的茶藨子叶状层菌菌丝体中麦角甾醇含量通过高效液相进行了检测，含量为3.073±0.009mg/g。

本发明的有益效果：

1.调整搅拌转速对发酵生产的影响