[发明专利]一种异常糖链糖蛋白的检测方法

说明书

本发明涉及一种异常糖链糖蛋白的检测方法：第一步，样本制备及检测，包括S1样本处理、S2样本孵育、S3分离、S4封闭、S5生物素标记的凝集素识别糖链异常蛋白、S6采用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素进行信号放大、第二步，制作标准曲线，在0‑20000ng/ml范围内，制备4个及以上不同质量浓度的异常糖链糖蛋白样品作为标准品，按照步骤S2‑S6对标准品进行处理，基于化学发光免疫分析仪或半自动发光仪获得发光值，将除0值以外的质量浓度和对应的发光值均转换成以2为底的对数，代入至四参数logistic曲线y=(A‑D)/[1+(x/C)^B]+D，得到标准曲线；第三步，样本浓度的计算。本发明的方法可以对不同类型的异常糖链糖蛋白进行单独分析，实现定量检测，准确率高。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种异常糖链糖蛋白的检测方法。

背景技术

蛋白质糖基化作为一种重要的翻译后修饰，对蛋白质结构和功能起着重要的作用，已发现在哺乳动物细胞中，约50％的蛋白有糖基化发生，这种修饰在细胞识别、粘附、细胞间相互作用和生长发育等许多细胞功能中发挥关键作用。

异常糖链糖蛋白主要由糖基化不完全或新的糖基转移酶被激活而产生新的糖基化引起，大量研究表明异常糖链糖蛋白的产生与肿瘤关系密切，如恶性肿瘤患者甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、r-谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、T抗原、a1抗胰蛋白酶及前列腺酸性磷酸酶等糖链结构发生改变，达到一定程度后，此类物质向血液排放，并较多地存在于外周血液种。

凝集素是一种从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白。它具有能与糖蛋白专一性、非共价可逆结合的特点。凝集素对糖蛋白的结合强度可随分子相互作用的数目增加，凝集素对糖蛋白的结合解离常数为约Kd10^-5～10^-7。

现有技术中，已经存在利用异常糖链糖蛋白与不同植物凝集素的亲和性，用于各种类型的肿瘤的诊断。但现有技术的检测方法存在如下缺陷：

其一，凝集素未做有效的预处理，其稳定性存在不足，影响检测的可靠性；凝集素的抗蛋白水解能力也需要进一步通过预处理的方式改善。

其三，检测方法的操作步骤存在可优化的空间，现有技术无法实现定量检测。

本发明旨在提供一种基于新型异常糖链糖蛋白检测试剂的异常糖链糖蛋白的检测方法。

发明内容

本发明的目的之一在于解决现有技术的不足 ，提供提供一种基于新型异常糖链糖蛋白检测试剂的异常糖链糖蛋白的检测方法。该方法能够有效的兼顾广谱性和准确性，另外，凝集素采用预处理，稳定性显著的改善，检测方法的可靠性好，而且预处理后的凝集素抗蛋白水解能力也显著提高。另外检测方法的操作步骤更合理，可靠性高。

本发明解决其技术问题采用的技术方案如下：

一种异常糖链糖蛋白的检测方法，所述检测方法的步骤如下：

第一步，样本制备及检测

S1样本处理

将待测标本使用样本稀释液稀释至1-20000倍，待测标本充分混匀获得样本液；

S2样本孵育

样本液置于固相A的孔中，所述固相A为聚苯乙烯和/或聚丙烯材质发光板，样本液pH控制在9.40-9.60，室温孵育2-3h或37℃恒温孵育30-60min，通过孵育使稀释后的样本结合在固相A上；或者，样本液置于反应杯，加入固相B，所述固相B为磁性微球，样本液pH控制在7.00-7.20， 室温孵育2-3h或37℃恒温孵育30-60min，通过孵育使稀释后的样本结合在固相B上；

S3分离