[发明专利]基于pH响应的异色纳米颗粒、含有该纳米颗粒的致病菌检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.基于pH响应的异色纳米颗粒，其特征在于，由pH指示剂分子、BSA、病原微生物的核酸适配体aptamer 1自组装而成；其中，所述aptamer 1偶联在pH指示剂分子上作为识别单元，BSA封闭非特异性位点，通过π-π堆积和氢键相互作用形成pH-BSA/aptamer 1的纳米粒子即为所述基于pH响应的异色纳米颗粒；

所述基于pH响应的异色纳米颗粒的制备方法，步骤为：

（1）将pH指示剂溶解于有机溶剂中，aptamer 1滴入pH指示剂溶液中，搅拌1h；

（2）将BSA溶液逐滴加入到步骤（1）的混合溶液中进行封闭，搅拌，离心，洗涤，即得；

所述pH指示剂分子在中性条件下无色或呈现较浅颜色，在碱性条件下呈现颜色变化；

所述pH指示剂分子为酚酞、百里酚酞中的任意一种。

2.根据权利要求1所述基于pH响应的异色纳米颗粒，其特征在于，所述病原微生物为食源性致病菌大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、溶血链球菌中的一种。

3.权利要求1所述基于pH响应的异色纳米颗粒在制备食源性致病菌检测试剂盒中的应用。

4.一种食源性致病菌的检测试剂盒，其特征在于，包括基于pH响应的异色纳米颗粒、涂有链霉亲和素的96孔板、5’端修饰生物素的待测目标病原微生物的核酸适配体aptamer 2；其中所述基于pH响应的异色纳米颗粒是由pH指示剂分子、BSA、待测目标病原微生物的核酸适配体aptamer 1自组装而成；其中，所述aptamer 1偶联在pH指示剂分子上作为识别单元，BSA封闭非特异性位点，通过π-π堆积和氢键相互作用形成pH-BSA/aptamer 1的纳米粒子即为所述基于pH响应的异色纳米颗粒；

所述基于pH响应的异色纳米颗粒的制备方法，步骤为：

（1）将pH指示剂溶解于有机溶剂中，aptamer 1滴入pH指示剂溶液中，搅拌1h；

（2）将BSA溶液逐滴加入到步骤（1）的混合溶液中进行封闭，搅拌，离心，洗涤，即得；

所述pH指示剂分子在中性条件下无色或呈现较浅颜色，在碱性条件下呈现颜色变化；

所述pH指示剂分子为酚酞、百里酚酞中的任意一种。

5.根据权利要求4所述食源性致病菌的检测试剂盒，其特征在于，所述病原微生物为大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、溶血链球菌中的一种。

6.使用权利要求4或5所述试剂盒非诊断目的的检测食源性致病菌的方法，其特征在于，步骤为：

将5’端修饰生物素的aptamer 2滴在涂有链霉亲和素的96孔板板表面上，孵育30min，用SSC-buffer洗涤；然后加入待测样品溶液，在37℃下孵育2h；再用SSC buffer清洗平板后，加入基于pH响应的异色纳米颗粒，在37℃孵育90分钟，用PBS洗涤；最后在平板中加入碱性溶液，检测每孔溶液的吸光度，确定待检测致病菌的浓度。