[发明专利]一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救的方法

权利要求书

1.一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采集坐果后的幼果，幼果经无菌处理后将幼嫩种子完整剥离；

（2）将上述幼嫩种子接种于诱导培养基上，光照培养至丛生芽2～4cm，同时获得胚性愈伤组织；

（3）将幼苗转接到生根培养基上，将胚性愈伤组织转接到分化培养基上，分化而来幼苗长至2～4cm再转接至生根培养基上；

（4）当幼苗发出5个以上根系时进行炼苗和移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，以软枣猕猴桃栽培品种‘猕枣2号’为母本，以美味猕猴桃为父本，采集的是坐果后35～50天的幼果，若不及时接种培养可在4℃冷藏保存1～2天。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中幼嫩种子剥离之前对果实进行无菌处理,

具体的无菌处理包括：切除果实前端喙和果柄基部，自来水冲洗30 min，75%酒精消毒30 s，无菌水冲洗2次，0.1% HgCl₂溶液灭菌7 min，无菌水冲洗3次。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中幼嫩种子的诱导培养，其培养基以MS培养基为基础，添加植物生长调节剂A、蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，PVP（聚乙烯吡咯烷酮）0.1 g/L，pH为5.8；光照培养至丛生芽2～4cm，温度25℃，光照15 h/黑暗9 h。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述植物生长调节剂A包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和玉米素:

其中6-苄氨基腺嘌呤为0.05～0.5 mg/L，萘乙酸为0.05～0.5 mg/L，玉米素为1～5mg/L；

坐果后35天幼嫩种子：植物生长调节剂A中6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L，萘乙酸0.1 mg/L，玉米素3 mg/L诱导效果最佳；

坐果后50天幼嫩种子：植物生长调节剂A中6-苄氨基腺嘌呤0.1 mg/L，萘乙酸0.5 mg/L，玉米素5 mg/L诱导效果最佳。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中幼苗生根培养，其培养基以1/2MS培养基为基础，添加植物生长调节剂B，蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，PVP 0.1 g/L，pH为5.8；在25℃条件下，光照培养，光照15 h/黑暗9 h；

所述植物生长调节剂B为吲哚丁酸，为0～1.0 mg/L；

其中0.5 mg/L生根效果最佳。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中胚性愈伤组织分化培养，其培养基以MS培养基为基础，添加植物生长调节剂C，蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，PVP 0.1 g/L，pH为5.8；在25℃条件下，光照培养，光照15 h/黑暗9 h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述植物生长调节剂C为吲哚丁酸和玉米素结合使用；

其中吲哚丁酸浓度为0.05～0.5 mg/L，玉米素浓度为3～5 mg/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中当幼苗发出5个以上根系时进行炼苗和移栽；

炼苗时将组培苗从组培室移出，置于室温下5天，后打开组培瓶再放置5天；取出幼苗，将根系部培养基清洗干净，移栽至营养钵内。