[发明专利]一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救的方法

说明书

本发明公开了一种软枣猕猴桃胚胎挽救方法，具体步骤如下：（1）采集坐果后35～50天的幼果置于4℃冰箱内备用，幼果经无菌处理后将幼嫩种子完整剥离。（2）将上述幼嫩种子接种于诱导培养基上，光照培养至丛生芽2～4cm并获得胚性愈伤组织。（3）将幼苗转接到生根培养基上，将胚性愈伤组织转接到分化培养基上，分化出来幼苗长至2～4cm同样转接至生根培养基上。（4）炼苗、移栽。本发明的实施，在胚胎发育早期，经人为干预抢救，避免了杂种胚败育的现象，实现了通过远缘杂交获取新种质；相较传统播种育苗，缩短了育种周期；通过丛生芽及胚性愈伤组织的获得，增大了新种质的繁殖系数，可有效保证新种质的保存数量。

技术领域

本发明属于猕猴桃组织培养领域，特别涉及一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救方法。

背景技术

远缘杂交是实现种(属)基因转移的一条重要途径,在植物遗传育种中应用广泛。但杂交的不亲和性及杂种的不育(孕)性是远缘杂交育种遇到的两大障碍。而受精后的杂种不育性,主要表现为幼胚停止发育、幼胚中途坏死、种子不能发芽及幼苗早期夭亡等,最终导致可供选择的杂种甚少。

猕猴桃属包含着54个种，21个变种，共约75个分类单元，绝大多数为中国特有种，仅尼泊尔的尼泊尔猕猴桃和日本的白背叶猕猴桃为周边国家特有分布。猕猴桃属植物物种间存在广泛的天然重叠分布区，并且分子系统学研究表明种间普遍存在杂交和基因渐渗现象，为猕猴桃种质创新提供了丰富遗传类型和广泛变异类型的天然基因库，为猕猴桃种间杂交提供了物质基础，可通过远缘杂交将其近缘植物的优良性状导入栽培猕猴桃品种中。

软枣猕猴桃果形小巧，果面光滑无毛，果肉细软多汁，酸甜可口，富含多种维生素、氨基酸、有机酸及多种矿质元素，具有较高的营养价值，适合直接鲜食或加工成果脯等食品。软枣猕猴桃果实果皮光滑无毛且具有可食性，深受种植者和消费者喜爱，但果实小。通过远缘杂交有可能选育出经济性状更为优良的软枣猕猴桃栽培品种(如大果)，首先需要解决的就是杂种不育的现象。美味猕猴桃果实较大，通过软枣猕猴桃与美味猕猴桃杂交改良果实大小性状，但实践中发现其结实率低，籽粒饱满的种子比例较低，果实成熟后饱满种子比例仅为19.54％，杂交种子后期出芽率也不理想。

发明内容

基于上述理论及现有技术问题，本发明提供一种软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救方法。在胚胎发育早期，经人为干预抢救，避免了杂种胚败育的现象，实现了通过远缘杂交获取新种质；相较传统播种育苗，缩短了育种周期；通过丛生芽及胚性愈伤组织的获得，增大了新种质的繁殖系数，可有效保证新种质的保存数量。远缘杂交胚胎挽救技术，操作简单，设备要求不高，非常值得广泛推广应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为一种软枣猕猴桃远远杂交胚胎挽救方法，具体步骤如下：

(1)采集坐果后35～50天的幼果置于4℃冰箱内待用，幼果经无菌处理后将幼嫩种子完整剥离。

(2)将上述幼嫩种子接种于诱导培养基上，光照培养至丛生芽2～4cm，同时获得胚性愈伤组织。

(3)将幼苗转接到生根培养基上，将胚性愈伤组织转接到分化培养基上，分化而来幼苗长至2～4cm再转接至生根培养基上。

(4)当幼苗发出5个以上根系时进行炼苗和移栽。

现有的技术中，通过胚胎挽救技术获得远缘杂交后代在许多高等植物中取得成功，但是在软枣猕猴桃远缘杂交胚胎挽救尚未报道，同时未涉及高效的繁殖系数。本发明通过对幼嫩种子离体培养获得丛生芽和胚性愈伤组织，胚性愈伤组织分化幼苗，幼苗生根培养，完整植株炼苗和移栽，从而获得远缘杂交后代。此胚胎挽救方法获得丛生芽数是萌发种胚数的1.9～4.125倍，同时获得胚性愈伤组织可持续分化幼苗，大大增加了繁殖系数，避免了杂种胚败育的现象，实现了通过远缘杂交获取新种质；相较传统播种育苗，也缩短了育种周期。该技术操作简单，设备要求不高，是获得软枣猕猴桃远缘杂交后代的一种有效途径。