[发明专利]一种GLP-1类似物片段活化酯的制备方法

说明书

本发明提供了一种GLP‑1类似物片段活化酯的制备方法，包括以下步骤：GLP‑1类似物的多肽片段与缩合剂在有机溶剂和碱的体系中反应。本发明的方法采用适合的缩合剂和易商业化生产的原料制备活化酯，有效缩短了活化酯的制备时间，产物无需后处理即可用于GLP‑1类似物的合成，避免了后处理过程中活化酯分解；本发明的方法适合工业化放大生产。

技术领域

本发明属于多肽制药领域，具体涉及一种GLP-1类似物片段活化酯的制备方法。

背景技术

GLP-1受体激动剂可同时降糖、减重、降压、调脂，保护胰岛β细胞功能，且具有心血管获益，为美国指南中推荐地位最高的新机制降糖药，美国指南推荐可用于一线治疗，推荐地位仅次于二甲双胍。

CN101910193A中介绍了结合使用重组表达技术和化学肽合成法产生在N端部分含非蛋白氨基酸端GLP-1类似物和衍生物的半重组方法。在说明书中介绍了做N-羟基琥珀酰亚胺酯的方法，用Boc-His(Boc)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-His(Boc)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-Aib-OH、Boc-His(Boc)-Aib-OH等物料和HSTU、TSTU或者DCC/NHS等反应得到N-羟基琥珀酰亚胺酯，然后经过一定的后处理得到活化酯。在实际生产中，物料不稳定、物料采购困难以及活化酯在处理过程中会分解等问题，不利于工业放大生产。

发明内容

本发明为了解决GLP-1类似物片段活化酯制备不利于工业放大生产的问题，本发明提供一种GLP-1类似物片段活化酯的制备方法。本方法通过选择多肽片段，与适合的缩合剂反应获得操作简单、易于放大生产的活化酯的制备方法。

本发明提供一种GLP-1类似物片段活化酯的制备方法，包括以下步骤：

GLP-1类似物的多肽片段与缩合剂在有机溶剂和碱的体系中反应，其中GLP-1类似物的多肽片段选自Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH、Boc-His(Trt)-Aib-OH或tBu-Ste-Glu(AEEA-AEEA-OH)-OtBu；缩合剂选自TSTU、DSC、HOBt或HONB；所述的碱选自DIEA、NMM、Et₃N；所述的有机溶剂选自DMF、NMP、DMSO或乙腈。

在本发明的一些实施方案中，反应温度为-10-30℃，优选为0-10℃。

在本发明的一些实施方案中，反应时间为0.5-1h，反应0.5-1h转化率大于70％，优选大于80％。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段与缩合剂的摩尔比为0.9-2.0，优选为1.0-1.2。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段与有机溶剂的质量体积比以mg/ml计为40-400：1，优选80-300：1。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段与碱的摩尔比为1-3：1；优选为1-1.5：1。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH与缩合剂在有机溶剂和碱的体系中反应；所述的缩合剂选自TSTU、DSC、HOBt或HONB，优选为DSC；所述的碱选自DIEA、NMM、Et₃N或DIC，优选为DIEA；所述的有机溶剂选自DMF、NMP、DMSO或乙腈，优选为DMF。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH与DSC在DMAP、有机溶剂和碱的体系中反应。

在本发明的一些实施方案中，多肽片段Boc-His(Trt)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-OH与DSC在DMAP、DMF和DIEA的体系中反应。