[发明专利]脂蛋白A亚型KIV-2结构域的拷贝数量检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种从基因水平检测Apo A分子KIV‑2亚型结构域的重复数检测的试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒采用基因合成的方法合成KIV‑2已知重复数的标准品，解决了无阳性样本或者样本样本量有限的确定；采用SYBR Green qPCR检测方法，能够高灵敏和特异性的检测总量≥1ng的基因组DNA，在1‑2内天快速得到结果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种从基因水平检测Apo A分子KIV-2亚型结构域的重复数检测的试剂盒及其检测方法。

背景技术

脂蛋白a(Lp(a))一种特殊的脂蛋白颗粒，血清Lp(a)浓度主要由基因控制，可作为动脉硬化性心脑血管疾病的独立危险因素指标。其结构在蛋白质方面与LDL很相似，但带有一个富含糖类和高度亲水性的载脂蛋白Apo(a)蛋白。Apo(a)蛋白中kringle4-2型结构域重复序列的数量由基因决定，每个Apo(a)粒子的KIV-2型重复数型重复数从3到40不等，因此Apo(a)的大小不仅在个体间且在同一个体都是高度可变的。

研究kringle4-2型重复数、Lp(a)浓度与疾病相关性。现有方法主要通过实时荧光定量PCR检测，检测已知KIV-2型重复数样本与待测样本KIV-2型重复数，计算出待测样本KIV-2型重复数。此方法需要有已知KIV-2型重复数的情况下才能检测，所以没有阳性样本则无法开展相关实验，并且阳性样本量无法实现量产。

因此，提供一种从基因水平检测Apo A分子KIV-2亚型结构域的重复数检测的试剂盒及其检测方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种检测KIV-2结构域的重复数量的诊断试剂盒及其制备方法、检测方法。通过基因合成标准品，解决了标准品差异较大，提高了检测方法的准确度等；通过qPCR及设计特异性引物提高了检测的灵敏度及特异性问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了引物组合，其特征在于，包括组合一和组合二：

组合一：

(1)、上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；和

(2)、下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

(3)、如(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

(4)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列；

组合二：

(5)、上游引物具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；和

(6)、下游引物具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；或

(7)、如(5)或(6)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或

(8)、与(5)或(6)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。

在本发明的一些具体实施方案中，所述取代、缺失或添加一个或多个中的多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个。

本发明还提供了所述的引物组合在制备检测KIV-2结构域的重复数量的试剂和/或试剂盒中的应用。

在上述研究的基础上，本发明还提供了所述的引物组合在制备检测动脉硬化性心脑血管疾病的试剂和/或试剂盒中的应用。