[发明专利]一种汽车内饰材料提取液及其细胞毒性测试方法

权利要求书

1.一种汽车内饰材料提取液的制备方法，其特征在于：步骤如下：

S1：受试物分类：将汽车内饰材料分为膜片状材料和不规则形状材料；

S2：受试物切割取样：对膜片状材料，根据表面积/体积计算，按照3cm2/mL±10%的浸提比例切割受试物样品，备用；对不规则形状的汽车内饰材料，根据质量/体积计算，按照0.1g/mL±10%的浸提比例切割受试物样品，备用；

S3：选取浸提介质：选用蒸馏水、植物油或人工汗液作为浸提介质；

S4：浸提：将受试物样品置于离心管中，按照浸提比例加入浸提介质，密封，并将离心管放置于转速为100±10r/min的水浴震荡装置中，浸提时间为24±1h；

S5：获得受试物浸提液：对离心管内的液体进行过滤，获得受试物浸提液；

所述S3中，将人工汗液的PH值调整为7.0±0.2；

所述S4中，浸提的温度分为常温浸提和高温浸提，常温浸提的温度为23±2℃，高温浸提的温度为80±2℃；

所述S4中，浸提温度的优先级为：高温浸提常温浸提；当浸提介质为植物油时，选择常温浸提。

2.一种汽车内饰材料的细胞毒性测试方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：准备受试物浸提液：准备由权利要求1所述的方法制备的受试物浸提液，备用；

S2：准备人体细胞：准备用于毒性测试的人体细胞，备用；

S3：确定细胞毒性试验方法：若浸提介质为蒸馏水或人工汗液，选择MTT法；若浸提介质为植物油，选择琼脂扩散法；两种方法均设置阴性对照和阳性对照；

S4：测试及细胞毒性分级：采用常温浸提和高温浸提，且浸提介质为人工汗液的受试物浸提液，进行MTT法测试，若结果预判为阴性，则该受试物浸提液判定为无细胞毒性，细胞毒性分级为0级，无需进一步实验；

若出现阳性结果，则认为该受试物浸提液存在潜在细胞毒性，需要进一步实验：采用常温浸提，且浸提介质为植物油的受试物浸提液，进行琼脂扩散法测试；若结果预判为阴性，则该受试物浸提液判定为无细胞毒性，细胞毒性分级为1级，无需进一步实验；

若出现阳性结果，则认为该受试物浸提液存在潜在细胞毒性，需要更进一步实验：采用高温浸提，且浸提介质为蒸馏水的受试物浸提液，进行MTT法测试；若结果预判为阴性，则该受试物浸提液判定为无细胞毒性，细胞毒性分级为2级；若出现阳性结果，则认为该受试物浸提液存在潜在细胞毒性，细胞毒性分级为3级。

3.根据权利要求2所述的一种汽车内饰材料的细胞毒性测试方法，其特征在于：所述S3中，采用琼脂扩散法的阴性对照采用高密度聚乙烯薄膜/颗粒浸提液，阳性对照采用0.1%二乙基二硫代氨基甲酸锌聚氨酯薄膜浸提液；采用MTT法的阴性对照采用高密度聚乙烯颗粒浸提液、阳性对照采用含二乙基二硫代氨基甲酸锌（ZEDC）的浸提液。

4.根据权利要求3所述的一种汽车内饰材料的细胞毒性测试方法，其特征在于：所述S4中，MTT法测试包括如下过程：

细胞铺板：设置调零孔和若干对照孔；在调零孔内加入培养液，形成空白对照，在对照孔内加入细胞悬浮液，进行细胞培养直至形成融合单层；

加入受试物：去除培养液，在部分对照孔内加入具有浓度梯度的受试物浸提液、在部分对照孔内加入阴性对照、在部分对照孔内加入阳性对照、在部分对照孔内加入对应的浸提介质，进行细胞培养；

MTT反应：去除培养液，每孔加入MTT溶液，孵育2-3h时间；然后去除MTT溶液，每孔加入异丙醇，震荡10min时间，在酶标仪上测定波长为570nm的吸光值；

反应结果：根据公式计算细胞存活率，并进行结果预判。