[发明专利]一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用，属于植物组织培养领域。本发明的再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒包括：种子萌发培养基、愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基和愈伤组织再分化培养基。本发明虎克姜花愈伤组织再生体系操作步骤简单，外植体污染率低，愈伤组织诱导速度快，同时再生效率高，不需壮苗和生根步骤，一步成苗。

技术领域

本发明涉及一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用，属于植物组织培养领域。

背景技术

与同属其他植物相比，虎克姜花植株矮小、叶片宽大、花色鹅黄、假种皮黑色，具有重要的研究和开发利用价值。植物的愈伤组织再生体系是对该植物进行进一步遗传操作和育种改良的基础技术平台。目前，在姜花属中，建立了愈伤组织再生体系的种类包括白姜花和红姜花。这两个种属于根茎粗大、侧根细、分布于中低海拔的类型，而虎克姜花为根茎小、侧根肥厚、分布于高海拔，种类差异较大。在外植体的选择上，目前主要选用叶片、花丝以及花药为外植体，污染率高、无菌处理效率低，愈伤组织诱导速度慢(需60～90天)，需添加复杂的培养物(维生素B5、谷氨酰胺、脯氨酸、麦芽提取物等)，步骤繁琐(需采用液体震荡培养等)，再生效率低，愈伤组织再生为植株的培养体系有待优化。

植物种子萌发出的幼苗，其下胚轴是活跃的生长点，已有较多植物以下胚轴为外植体诱导出愈伤组织并再生出植株。但在这些技术方案中，在不同植物之间所选用的植物生长调节剂种类及其浓度配比具有很大差异。本发明基于虎克姜花的遗传特点，以种子萌发无菌苗的下胚轴为外植体，经过对愈伤组织诱导和再分化条件进行的系统试验研究，构建了简单而高效的愈伤组织再生为植株的培养体系。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种污染率低、诱导率高、诱导速度快、操作简便的经由愈伤组织途径制备的再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一方面，本发明提供了一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒，包括种子萌发培养基、愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基和愈伤组织再分化培养基；其中所述种子萌发培养基包括MS培养基、蔗糖和琼脂；所述愈伤组织诱导培养基包括MS培养基、激动素、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖和琼脂；所述愈伤组织增殖培养基包括MS培养基、激动素、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖和琼脂；所述愈伤组织再分化培养基包括MS培养基、6-苄氨基嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖和琼脂。

所述愈伤组织诱导培养基和所述愈伤组织增殖培养基的成分相同，但成分中激动素和2,4-二氯苯氧乙酸的使用浓度不同。本发明所述培养试剂盒，制备方法简单，不需添加复杂的培养物便能诱导愈伤组织分化完成，无需在固体和液体培养之间来回转换。

优选地，所述种子萌发培养基中，蔗糖的浓度为28～30g/L，琼脂的浓度为7.0～8.0g/L。

优选地，所述愈伤组织诱导培养基中，激动素的浓度为0.1～0.5mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.5～1.0mg/L，蔗糖的浓度为28～30g/L，琼脂的浓度为7.0～8.0g/L。

下胚轴在不含任何激素的诱导培养基里不能诱导出愈伤组织，在愈伤组织诱导培养基的诱导下，可长出生长快，松散性好的愈伤组织。

优选地，所述愈伤组织增殖培养基中，激动素的浓度为0.1～0.2mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.3～0.5mg/L，蔗糖的浓度为28～30g/L，琼脂的浓度为7.0～8.0g/L。

愈伤组织增殖培养基可以使愈伤组织快速增殖，得到初始接种量60倍以上的愈伤组织。

优选地，所述愈伤组织再分化培养基中，6-苄氨基嘌呤的浓度为1.0～2.0mg/L，吲哚-3-乙酸的浓度为0.1～2.0mg/L，蔗糖的浓度为28～30g/L，琼脂的浓度为7.0～8.0g/L。