[发明专利]SARS-CoV-2病毒核酸等温快速检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种非诊断性的靶标核酸分子的检测方法，其特征在于，包括步骤：

(a) 提供一含靶标核酸分子的待检测的样本，所述靶标核酸分子包括单链DNA；

(b) 将所述待检测的样本与切割试剂或含所述切割试剂的切割缓冲液进行混合，从而形成一检测体系，其中，所述的切割试剂包括：2个向导ssDNA、基因编辑酶Ago、和第一报告核酸分子，所述第一报告核酸分子带有荧光基团和淬灭基团，并且，所述的2个向导ssDNA之间彼此相邻且无间隔序列；和

(c) 对所述检测体系进行LAMP检测，从而获得荧光信号值，其中，所述检测体系中检测到荧光信号值，则表示所述样本中存在靶标核酸分子；而所述检测体系中没有检测到荧光信号值，则表示所述样本中不存在靶标核酸分子，所述各向导ssDNA中的5'端的第一位核苷酸为T，所述向导ssDNA为磷酸化的单链DNA分子，所述基因编辑酶Ago为PfAgo(Pyrococcus furiosus Ago)，所述的靶标核酸分子选自下组：病原微生物的核酸分子、基因突变的核酸分子、和特异靶标核酸分子，所述的病原微生物为病毒；

所述的靶标核酸分子被所述基因编辑酶Ago切割后，产生次级向导ssDNA，所述次级向导ssDNA的长度为10-60nt；

并且当用于对病毒进行分型检测时，所述切割试剂还包括额外的2个报告核酸分子，即第二报告核酸分子和第三报告核酸分子，所述2个报告核酸分子相对于次级ssDNA的10或11位引入mismatch，这样保障次级ssDNA相对于所述报告核酸分子至少有一个mismatch。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的待检测的样本包括未经扩增的样本以及经过扩增的样本。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述向导ssDNA的长度各自独立地为10-60nt。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述次级向导ssDNA的长度为10-40nt。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述次级向导ssDNA的长度为15-17nt。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一报告核酸分子的长度为9-100nt。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的病毒包括：冠状病毒、流感病毒、HIV、肝炎病毒、副流感病毒。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病毒选自下组：SARS、SARS-CoV-2、HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、Mers-Cov、或其组合。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对病毒进行分型检测为判断病毒是野生型还是突变型。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二报告核酸分子、第三报告核酸分子的长度各自独立地为9-200nt。