[发明专利]SARS-CoV-2病毒核酸等温快速检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了SARS‑CoV‑2病毒核酸等温快速检测试剂盒及检测方法。本发明的检测方法包括：(a)提供一含靶标核酸分子的待检测的样本；(b)将所述待检测的样本与切割试剂或含所述切割试剂的切割缓冲液进行混合，从而形成一检测体系，其中，所述的切割试剂包括：2个向导ssDNA、基因编辑酶(Ago)、和第一报告核酸分子，所述第一报告核酸分子带有荧光基团和淬灭基团，并且，所述的2个向导ssDNA之间彼此相邻；和(c)对所述检测体系进行荧光检测，从而获得荧光信号值，其中，所述检测体系中检测到荧光信号值，则表示所述样本中存在靶标核酸分子；而所述检测体系中没有检测到荧光信号值，则表示所述样本中不存在靶标核酸分子。本发明的方法可高灵敏度、准确性的检测靶标核酸分子。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及SARS-CoV-2病毒核酸等温 快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术

目前，新冠病毒，尤其是低丰度病毒的精准和定量检测对于病人确诊、后 续控制和治疗都具有积极影响。自病毒基因组测序结果推出后，针对特定核酸 序列开发检测产品成为关注点。到目前为止，已有七家体外诊断公司的产品投 入市场，还有二十余家企业也相继推出检测产品。实时荧光PCR(逆转录PCR) 法是检测COVID-19病毒核酸的一种临床标准。逆转录PCR即逆转录-聚合酶 链反应，其原理是，提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板， 采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进 行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。从临床应用效果看，核酸诊断 试剂盒比常规基因组测序分析具有成本和时间上的优势，但因其多基于荧光 PCR方法，仍然还存在检测时间较长(2小时左右)、价格高(200元/次)、设备昂 贵(Q-PCR仪器30-60万元)，及操作人员专业要求高等问题，因此，目前确诊 和疑似病人的诊断仍是后续防控和治疗的局限因素。开发新型传染病的诊断新 技术、研制与其配套的POCT(即时现场检测)仪器，实现快速(低于1小时)、低 价、灵敏等基层也能推广应用的产品，是急需攻克的科研难题。

一步法逆转录LAMP核酸扩增技术的原理:逆转录LAMP即逆转录和Loop- MediatedIsothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合，专门用于快速扩增 RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条 模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 15-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至 优于逆转录PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观 察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细 菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。近日，逆转录LAMP法(逆转录环介导等温扩增法)也应用到了SARS-CoV-2病毒核酸检测中。但逆转录LAM P法检测新型冠状病毒还存在假阳性高、可靠性差等问题。

并且基于CRISPR系统的核酸检测技术也仍存在许多限制因素，例如CRI SPR对检测基因序列的限制、多重检测难以实现、crRNA设计相对复杂且合成 价格昂贵等，仍然成为其进入市场的限制。

因此，本领域迫切需要开发快速、简便、高效、高灵敏并且高准确性的检测 SARS-CoV-2的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速、简便、高效、高灵敏并且高准确性的检测 SARS-CoV-2的方法。

在本发明第一方面，提供了一种靶标核酸分子的检测方法，包括步骤：

(a)提供一含靶标核酸分子的待检测的样本，所述靶标核酸分子包括单链 DNA；

(b)将所述待检测的样本与切割试剂或含所述切割试剂的切割缓冲液进行混 合，从而形成一检测体系，其中，所述的切割试剂包括：2个向导ssDNA、基因 编辑酶(Ago)、和第一报告核酸分子，所述第一报告核酸分子带有荧光基团和淬 灭基团，并且，所述的2个向导ssDNA之间彼此相邻；和