[发明专利]化湿败毒组合物的检测方法

权利要求书

1.一种化湿败毒组合物的检测方法，其特征在于，所述化湿败毒组合物主要包括下述组分：麻黄3-60份，炒苦杏仁4.5-90份，生石膏7.5-150份，甘草1.5-30份，广藿香5-100份，厚朴5-100份，麸炒苍术7.5-150份，炒草果仁5-100份，法半夏4.5-90份，茯苓7.5-150份，大黄2.5-50份，黄芪5-100份，葶苈子5-100份，赤芍5-100份，辅料适量；所述化湿败毒组合物被制成颗粒剂；

所述化湿败毒组合物的检测方法包括采用高效液相色谱法测定化湿败毒组合物中总蒽醌含量和游离蒽醌含量，并计算结合蒽醌含量；

其中，结合蒽醌含量＝总蒽醌含量-游离蒽醌含量；

其中，总蒽醌含量的测定方法包括：

(1)取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚适量，加甲醇制成混合溶液，制得对照品溶液；

(2)取化湿败毒组合物，利用甲醇提取，制得总蒽醌供试品溶液；

(3)吸取对照品溶液和总蒽醌供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，测定得到化湿败毒组合物中总蒽醌含量；

游离蒽醌含量的测定方法包括：

(一)取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚适量，加甲醇制成混合溶液，制得对照品溶液；

(二)取化湿败毒组合物，利用甲醇提取，制得游离蒽醌供试品溶液；

(三)吸取对照品溶液和游离蒽醌供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，测定得到化湿败毒组合物中游离蒽醌含量；

总蒽醌含量的测定方法和游离蒽醌含量的测定方法均采用以下洗脱程序进行：

0～10min，流动相A从35％→40％，流动相B从65％→60％；

10～38min，流动相A从40％→60％，流动相B从60％→40％；

38～48min，流动相A为60％，流动相B为40％；

其中，所述化湿败毒组合物中结合蒽醌的含量≥0.016wt％。

2.如权利要求1所述的化湿败毒组合物的检测方法，其特征在于，所述总蒽醌供试品溶液由下述方法制得：

取化湿败毒组合物0.2～0.5g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20～30mL，加热回流提取20～30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10～15mL，减压回收溶剂至干，加8％盐酸溶液10～15mL，超声处理2～5分钟，再加三氯甲烷10～20mL，加热回流1～3小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2～5次，每次10～15mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.如权利要求1所述的化湿败毒组合物的检测方法，其特征在于，所述游离蒽醌供试品溶液由下述方法制得：

取化湿败毒组合物0.2～0.5g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25～30mL，称定重量，加热回流20～60分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4.如权利要求1所述的化湿败毒组合物的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液由下述方法制得：

称定芦荟大黄素对照品1.581mg、大黄酸对照品3.017mg、大黄素对照品1.604mg、大黄酚对照品2.656mg、大黄素甲醚对照品5.221mg，置100mL量瓶中，加甲醇分别制成每1mL含芦荟大黄素15.807μg、大黄酸30.167μg、大黄素16.039μg、大黄酚26.563μg、大黄素甲醚52.213μg的母液；分别精密吸取上述芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚母液各1mL，大黄素甲醚母液0.1mL，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素1.581μg、大黄酸3.017μg、大黄素1.604μg、大黄酚2.656μg、大黄素甲醚0.522μg的混合溶液，即得。