[发明专利]一种阿齐沙坦中盐酸羟胺的检测方法

说明书

本发明提供了一种阿齐沙坦中盐酸羟胺的含量的检测方法，所述的方法采用苯甲醛对羟胺进行衍生化处理，所述的色谱柱为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为10mmol/L甲酸铵溶液（含0.1%甲酸），流动相B为乙腈，采用梯度洗脱，无需对样品进行特殊处理，无基质影响。所述的检测方法采用阿齐沙坦为供试品经系统适用性、专属性、检测限、耐用性等项目验证，均符合相关要求。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法检测样品中盐酸羟胺杂质含量，更具体的是采用高效液相色谱法法检测阿齐沙坦中盐酸羟胺杂质含量。

背景技术

盐酸羟胺（分子式NH2OH·HCl，CAS：5470-11-1）是阿齐沙坦（分子式C25H20N4O5，CAS: 147403-03-0）合成工艺中使用到的物料，文献（Synthesis of Azilsartan and ItsSelected Potential Impurities[J]. Journal of Heterocyclic Chemistry,2013,50(4).）报道了采用盐酸羟胺合成制备得到阿齐沙坦，故盐酸羟胺有可能会残留至阿齐沙坦成品中。

目前未见针对阿齐沙坦原料药中盐酸羟胺含量的检测方法，发明人对盐酸羟胺在阿齐沙坦中的检测是通过自主开发的液相色谱方法实现的，并参考ICH Q2及《中国药典》四部9101指导原则对此方法进行了验证,符合相关的要求。

文献（M. Song, P. Lu, S.Wu, Y. Qiao and T. Hang , Anal. Methods, 2016,DOI: 10.1039/C6AY02675C.）报道了采用HPLC方法对齐留通（zileuton）和伏立诺他（vorinonstat）中遗传毒性杂质羟胺进行痕量分析的方法，此方法基于使用UV检测的常规9-芴基甲基氯甲酸酯的柱前衍生化方法。为了避免在衍生化过程中API的降解，提出了在衍生化之前利用沉淀进行预处理，该方法显示了可靠的回收率和出色的抗干扰能力。

专利CN105628824B报道了采用HPLC方法对阿齐沙坦原料药中可能存在的杂质进行检测，色谱柱固定相为十八烷基键合硅胶，流动相A为0.1%磷酸水溶液：乙腈=80:20，流动相B为0.1%磷酸水溶液：乙腈=20:80，柱温为30℃～40℃，检测波长为208nm～212nm。但是用于阿齐沙坦中盐酸羟胺的检测，基质影响大，回收率不符合标准。另外发明人还研究了其他多种流动相的，如采用流动相A为0.05%甲酸水溶液、流动性B为0.05%甲酸乙腈溶液，采用苯甲醛对盐酸羟胺进行衍生化，采用多种流动性比例进行研究，但是基质影响大，回收率难以符合标准。最终，发明人意外发现，无需对待测样品进行特殊处理回收率即可符合标准的条件，并对该检测方法进行了方法学验证，符合相关的标准。

发明内容

本发明提供了一种阿齐沙坦中盐酸羟胺的含量的检测方法，本发明人经过对液相色谱条件的深入研究，获得了无需对待测阿齐沙坦样品进行特殊处理回收率即可符合标准的条件，并对方法进行了方法学验证，符合相关的要求。所述的检测方法采用液相色谱（LC），该方法灵敏度高、准确性高、重复性好，可用于阿齐沙坦样品中盐酸羟胺的检测。

本发明提供的一种阿齐沙坦中盐酸羟胺杂质含量的检测方法，其特征在于采用HPLC进行检测，包括如下步骤：

溶液配制：分别配制空白溶液、对照品溶液、灵敏度溶液和供试品溶液；

其中，所述的对照品溶液和灵敏度溶液均为采用盐酸羟胺溶解于甲醇，在衍生介质、衍生剂的条件下经过衍生化配制而成；供试品溶液采用供试样品溶解于衍生介质、加甲醇、衍生剂配制而成；所述的空白溶液为采用甲醇、衍生介质、衍生剂配制而成；

所述的衍生介质为氢氧化钠的甲醇溶液，优选浓度为0.25mol/L；

所述的衍生剂为苯甲醛的甲醇溶液，浓度优选0.5mg/ml；

所述的供试样品为阿齐沙坦。