[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒染色方法及其应用在审
| 申请号： | 202010834928.5 | 申请日： | 2020-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN112146965A | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 包文斌;王芳;吴正常;殷宗俊;吴圣龙 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N21/64;C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 地址： | 225009 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 流行性 腹泻 病毒 染色 方法 及其 应用 | ||
1.一种猪流行性腹泻病毒染色的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）将染色剂与猪流行性腹泻病毒液混匀，避光孵育得到染色病毒液；
（2）吸附柱离心法去除过量的染色剂；
（3）将染色的猪流行性腹泻病毒液避光-70℃冷冻保存。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中将染色剂与猪流行性腹泻病毒液按1:8~12的体积比混合；优选的，按1:10的体积比混合。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的染色剂为DyLightDye 594染色剂。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的猪流行性腹泻病毒液的滴度达到1×105 ~1×106 TCID50/ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述避光孵育的时间为50~70分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中去除过量的染色剂的过程为：将染料去除树脂添加至含有吸附柱的离心管中，在低温条件下离心后收集吸附柱并置于新的离心管中，添加步骤（1）得到的染色病毒液至吸附柱中，在低温条件下离心后收集染色的猪流行性腹泻病毒液。
7.一种用于检测猪流行性腹泻病毒的PCR扩增引物，其特征在于，该引物包括正向引物和反向引物，其中，正向引物: 5’-ACTAGCGACCAGCTACCAGA-3’；反向引物: 5’-TCAACTCGGTTGAGCCACTC-3’。
8.权利要求1~6中任一所述的方法制备的染色的猪流行性腹泻病毒液在荧光示踪猪流行性腹泻病毒感染中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将染色的猪流行性腹泻病毒正常感染宿主细胞，通过荧光示踪病毒感染情况。
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