[发明专利]一种肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法

权利要求书

1.一种肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)对待检测肺癌肿瘤组织DNA样本进行亚硫酸盐修饰处理；

2)亚硫酸盐处理后的DNA、20％，40％，60％，80％，100％甲基化标准品DNA、SHOX2特异性PCR检测引物、SHOX2特异性探针、内参基因引物和内参基因探针进行RT-PCR反应；

3)测量肺肿瘤组织DNA、20％，40％，60％，80％，100％甲基化标准品DNA的Ct值。

2.根据权利要求1所述的肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法，其特征在于，所述SHOX2特异性PCR检测引物的S-M-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述内参基因特异性PCR检测引物的A-M-F的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

3.根据权利要求2所述的肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法，其特征在于，所述SHOX2特异性PCR检测引物的S-M-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述内参基因特异性PCR检测引物的A-M-R的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示。

4.根据权利要求3所述的肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法，其特征在于，所述SHOX2特异性探针的S-M-P的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述内参基因特异性探针的A-M-P的核苷酸序列如SEQ ID No：6所示。

5.根据权利要求4所述的肺肿瘤组织DNA中SHOX2基因甲基化检测方法，其特征在于，所述qRT-PCR反应的反应方法，包括以下步骤：

1)在95℃下保持3分钟；

2)降温至58℃，保持20秒；

3)升温至72℃，保持30秒；

4)将步骤2)和步骤3)进行50次循环；

5)在72℃下保持1分钟。