[发明专利]用于鉴定短乳杆菌的恒温检测方法及其专用引物与试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于鉴定短乳杆菌的恒温检测方法及其专用引物与试剂盒。本发明提供的特异引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成，六种引物依次如序列表的序列2至7所示。所述特异引物组的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定短乳杆菌；(b2)检测待测样本中是否含有短乳杆菌。本发明利用环介导等温扩增技术扩增短乳杆菌特异性基因片段，填补了啤酒中短乳杆菌LAMP检测方法的空白，具特异性强、操作简单、快速便捷等优点，可用于啤酒质量监控，适合酒厂基层应用和现场快速检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于鉴定短乳杆菌的恒温检测方法及其专用引物与试剂盒。

背景技术

短乳杆菌(Lactobacillus breris)广泛分布于自然界中，属乳杆菌目、乳杆菌科、短乳杆菌属，常见于牛奶、酸乳酒、干酪、酸泡菜中。啤酒中存在短乳杆菌时，常引起啤酒酸度升高、粘度增加，更甚者造成啤酒浑浊沉淀，影响啤酒口感品质。由短乳杆菌污染引起的啤酒质量事件屡见不鲜，据统计，日常啤酒污染事件中50％以上是由短乳杆菌引起的，短乳杆菌的快速检测成为啤酒厂质量监控亟待解决的一大问题。

目前对于短乳杆菌的检测方法主要有培养鉴定法、生物发光和免疫学方法及分子生物学方法。培养鉴定法是应用NBB-A、NBB-B、MRS等培养基进行菌体培养，并通过染色镜检、生理生化实验等确定菌体类型，是目前国内啤酒厂最常用的检测方法。这种方法在目前所有类型的检测方法中精确度较高、成本小、对实验人员要求低，能够满足基层应用需求，但无论采用哪个那种培养基进行培养鉴定，结果检出都需要5-7天以上，无法及时反映啤酒污染情况，不能适应质量快速监控的需求。生物发光和免疫学方法主要包括ATP生物发光检测技术和抗原抗体检测法；ATP生物发光检测技术通过检测微生物代谢过程产生的ATP达到检测微生物的目的，利用这种方法进行检测时能够快速得到检测结果，也能定量微生物，但无法对不同微生物进行定性鉴定，且易受外界干扰，结果不稳定；抗原抗体法基于抗原与相应抗体发生特异性结合形成沉淀复合物原理进行微生物的定性检测，包括凝集反应、沉淀反应、酶联免疫吸附等，这种微生物诊断方法具有特异性强的优点，但抗体筛选过程复杂，试剂检测成本昂贵，且易受人为操作干扰影响，无法适应酒厂基层检测需求。

分子生物学方法是基于核酸水平检测，常见的应用于微生物检测的分子生物学方法有荧光原位杂交技术(FISH)、基因芯片技术及聚合酶链式反应PCR等，这些方法的优点是特异性强、耗时短，但大多因操作复杂、对设备、操作人员要求高等问题，难以在酒厂检测中得到有效开展。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于鉴定短乳杆菌的恒温检测方法及其专用引物与试剂盒。

本发明提供的特异引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；

所述引物F3为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物B3为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a4)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a6)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：