[发明专利]一种毛囊间充质干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、获取原代毛囊组织块；

步骤二、将获取的原代毛囊组织块接种于细胞培养基中进行培养处理；

步骤三、对扩增的细胞进行生物学鉴定，结果显示：(1)细胞贴壁；(2)细胞表型CD44⁺≥95％，CD105⁺≥95％，CD45⁺≤2％，CD34⁺≤2％；(3)可成脂、成骨、成软骨。

2.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤一的具体操作步骤如下：

提取9个以上完整毛囊，清洗后用组织剪机械剪切成碎块。

3.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤二中，所述细胞培养基为含有5％血清替代品的无血清培养基。

4.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤二中，所述细胞培养基中含有表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板源性生长因子和血管内皮生长因子，表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板源性生长因子、血管内皮生长因子的含量比为1:1:1:1。

5.根据权利要求4所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，所述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板源性生长因子、血管内皮生长因子在细胞培养基中的含量均为10～25ng/ml。

6.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤二中，培养处理条件为：温度为37℃，CO₂浓度为5％。

7.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤二中，培养处理过程中不使用胰酶或胶原酶，直接将获取的原代毛囊组织块接种于细胞培养基中。

8.根据权利要求1所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法，其特征在于，步骤二中，在培养处理过程中，原代组织块7天之内不做任何处理，第7天半量换液，第10天实现至少3个克隆细胞团块的爬出。第10天传代，之后每隔三天传代。

9.如权利要求1至8中任意一项所述的一种毛囊间充质干细胞的培养方法所获取的毛囊间充质干细胞。