[发明专利]一种D-二聚体检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：包括R1试剂和R2试剂；

所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：30-150mm/L磷酸盐缓冲液、0.5-2g/L聚乙二醇-10000、0.8-0.9g/L氯化钠、0.1g/L叠氮钠，溶剂为纯化水；

所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：0.5-2mg/mL鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳、10-50mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、8g/L氯化钠、3g/L牛血清白蛋白、0.1g/L吐温20、0.1g/L叠氮钠，溶剂为纯化水；

所述R2试剂的制备方法包括以下步骤：

将D-二聚体单抗溶液加入活化的聚苯乙烯微球溶液中，混合后置于37℃磁力水浴箱中搅拌偶联，偶联结束后，离心弃去上清，洗涤后，制得鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳；

将所述鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳与4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液混合，加入纯化水、牛血清白蛋白和叠氮钠，搅拌后置于52℃条件下搅拌封闭，然后往封闭完成的溶液中加入氯化钠，混合搅拌后即制得R2试剂。

2.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述R2试剂具体由以下浓度的原料制成：0.5mg/mL鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳、50mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、8g/L氯化钠、3g/L牛血清白蛋白、0.1g/L吐温20、0.1g/L叠氮钠，溶剂为纯化水。

3.根据权利要求1或2所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述R2试剂中4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液的pH值为6.5-8.5。

4.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述R2试剂的制备方法包括以下步骤：将鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳与4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液混合，加入纯化水、牛血清白蛋白和叠氮钠，搅拌后置于52℃条件下搅拌封闭1.5h，然后往封闭完成的溶液中加入氯化钠，混合搅拌后即制得R2试剂。

5.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳的制备方法包括以下步骤：将鼠抗人D-二聚体单克隆抗体与粒径为180-300nm的羧化改性聚苯乙烯乳胶颗粒在4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中通过化学交联法致敏，再经离心、洗涤后，即制得鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳。

6.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳的制备方法具体包括以下步骤：

(1)将粒径为180-300nm的聚苯乙烯微球置于40mL纯化水中，得到终浓度为0.16g/L的微球稀释溶液；

(2)以纯水分别溶解1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)、N-N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，得到浓度为0.02112mg/mL的碳化二亚胺溶液、0.02112mg/mL琥珀酰亚胺溶液；

(3)以步骤(1)微球稀释溶液中所含聚苯乙烯微球的重量为计，按50％的活化比例将EDC/NHS溶液加入微球稀释溶液中，室温搅拌活化15min，磁力搅拌速度为15r/min，得到活化的聚苯乙烯微球溶液；

(4)D-二聚体单抗溶液的制备：将D-二聚体单克隆抗体用pH7.5、浓度5mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液稀释至终浓度为0.08mg/mL，溶液体积为40mL；

(5)将D-二聚体单抗溶液加入步骤(3)活化的聚苯乙烯微球溶液中，混合后置于37℃磁力水浴箱中搅拌偶联2h，搅拌速度为15r/min；

(6)偶联结束后，离心弃去上清，洗涤后，即制得鼠抗人D-二聚体单克隆抗体胶乳。

7.根据权利要求1所述的D-二聚体检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂的制备方法包括以下步骤：往磷酸盐缓冲液中加入氯化钠、聚乙二醇-10000、叠氮钠和纯化水，混合后，即制得R1试剂。