[发明专利]用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒。所述试剂盒中包含扩增目的基因VP2的引物对(SEQ ID NO:1‑2)以及检测目的基因的Taqman探针(SEQ ID NO:3)。本发明还提供猫泛白细胞减少症病毒的实时荧光定量PCR检测方法，该方法能够快速、灵敏地检测出猫泛白细胞减少症病毒，提高了检测结果的准确性，对于临床样品的快速诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术，具体地说，涉及一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒。

背景技术

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus，FPV)是细小病毒科，细小病毒亚科成员，通常引起幼猫急性且致命的疾病，引起严重的胃肠炎和免疫抑制性疾病，具有高度的传染性，其中幼小易感动物发病率和死亡率高达25～90％，成年猫感染后常常出现免疫应答，无典型临床症状，怀孕母猫感染后，经过血液循环可以扩散至胚胎，造成感染并且导致流产。犬细小病毒(canine parvovirus，CPV)由FPV进化而来，虽然CPV与FPV基因组序列仅有0.5％的差异，但CPV-2不能在猫体内复制，但其变体(CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c)能够感染且在猫体内复制，给FPV的诊断带来挑战。

目前，对FPV检测方法主要包括电镜观察法，观察是否符合FPV形态特征、病毒分离培养法、血清学监测法、血凝(HA)和血凝抑制实验(HI)，常见的FPV核酸检测方法包括普通PCR和Green I实时荧光定量PCR，该方法基于Green染料与DNA双螺旋小沟结合的原理，实现荧光定量。但这种结合为非特异性的，非特异性产物和引物二聚体的形成，无法达到检测目的。且上述方法存在检测周期较长且敏感性低的问题，不适合临床样品的快速检测和流行病学调查。目前尚无TaqMan qPCR技术检测猫泛白细胞减少症病毒的相关报道，VP2为主要结构蛋白，是猫泛白细胞减少症病毒衣壳的主要成分，暴露于衣壳蛋白表面，是病毒的主要免疫保护性抗原蛋白，本发明针对病毒VP2基因建立快速、敏感的TaqMan qPCR检测试剂盒，用于临床早期诊断。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的引物和探针及检测试剂盒。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一对猫泛白细胞减少症病毒检测引物，包括序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO:2所示的反向引物。

第二方面，本发明提供与所述引物配套使用的探针，探针序列如SEQ ID NO:3所示，探针序列的5′端具有荧光基团，3′端具有淬灭基团。

第三方面，本发明提供含有SEQ ID NO:1-2所示引物和/或SEQ ID NO:3所示探针的检测试剂或试剂盒。

第四方面，本发明提供猫泛白细胞减少症病毒检测试剂盒，包括SEQ ID NO:1-3所示的引物和探针。

所述试剂盒还包括dNTPs、DNA聚合酶、可溶性镁盐、PCR反应缓冲液、阳性标准质粒等中的至少一种。

第五方面，本发明提供一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的qPCR反应体系，所述反应体系按20μL计包含：2×AceQ qPCR Probe Master Mix 10μl，DNA模板1μl，10μM正向引物和反向引物各0.2～1μl，10μM探针0.4～0.6μl，ddH₂O补齐至20μl。

第六方面，本发明提供猫泛白细胞减少症病毒检测方法(含非诊断目的)，包括如下步骤：

(1)提取待测样品中的DNA；

(2)以DNA为模板，利用SEQ ID NO:1-3所示的引物和探针进行PCR扩增；

(3)分析PCR扩增产物。