[发明专利]基于适配体识别的犬细小病毒上转换层析试纸条

权利要求书

1.基于适配体识别的犬细小病毒上转换层析试纸条，包括依次相连的样品垫、结合垫、分析膜和吸水垫以及位于下方作为组装平台的PVC底板，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述分析膜上设有检测线及质控线，其特征在于：

所述结合垫上包被有上转换发光纳米材料，所述上转换发光纳米材料包括上转换发光纳米材料UCNPs1、上转换发光纳米材料UCNPs2、上转换发光纳米材料UCNPs3；

所述上转换发光纳米材料通过聚丙烯酸改性表面具有羧基基团后连接氨基修饰的犬细小病毒适配体形成上转换适配体探针UCNPs-Apt CPV1；

所述上转换发光纳米材料与犬细小病毒适配体偶联，获得上转换适配体探针UCNPs1-Apt CPV1、UCNPs2-Apt CPV1和UCNPs3-Apt CPV2；

将犬细小病毒适配体识别序列的互补序列DNA CPV与非识别序列的互补序列DNA polyA通过链霉亲和素固定在硝酸纤维素膜的检测线及质控线上。

2.根据权利要求1所述的基于适配体识别的犬细小病毒上转换层析试纸条，其特征在于，所述上转换发光纳米材料的制备方法为：

步骤SS1：采用高温热分解法合成上转换发光纳米材料UCNPs1；

步骤SS2：选用聚丙烯酸作为配体交换剂，在常温下对上转换发光纳米材料UCNPs1进行羧基化修饰；

步骤SS3：采用水热法合成上转换发光纳米材料UCNPs2；

步骤SS4：选用聚丙烯酸作为配体交换剂，在常温下对上转换发光纳米材料UCNPs2进行羧基化修饰；

步骤SS5：采用水热法合成上转换发光纳米材料UCNPs3；

步骤SS6：对上转换发光纳米材料UCNPs3进行氨基修饰。

3.根据权利要求2所述的基于适配体识别的犬细小病毒上转换层析试纸条，其特征在于：

所述步骤SS1中采用高温热分解法合成上转换发光纳米材料UCNPs1的方法为：

步骤SS11：称取YbCl₃·6H₂O、YCl₃·6H₂O和ErCl₃，加入到100mL三口烧瓶中，并加入6mL油酸和15mL十八烯；

步骤SS12：在搅拌、通氮气环境下，逐渐升温至160℃，使步骤SS01中的试剂形成均一的溶液，自然冷却至室温；

步骤SS13：称取4mmol/L的NH₄F和2.5mmol/L的NaOH溶于10mL甲醇溶液中，将所得溶液逐滴加入到三口烧瓶中，升温至60℃磁力搅拌30min，后逐渐升温蒸发去除甲醇；

步骤SS14：三口烧瓶持续通氩气，加入冷凝回流装置，升温至300℃，持续反应1h；

步骤SS15：反应结束后，关闭装置，自然冷却至室温；

步骤SS16：用水和乙醇将所得材料离心清洗三次，并于70℃下烘干8h，得白色固体粉末，储存备用；

所述步骤SS2中对上转换发光纳米材料UCNPs1进行羧基化修饰的方法为：

步骤SS21：于圆底烧瓶中，加入200mg聚丙烯酸和8mL无水乙醇溶液，搅拌均匀，使其充分溶解；

步骤SS22：称取30mg油酸修饰的NaYF₄：Yb，Er上转换材料分散于4mL氯仿溶液，然后逐滴加入到步骤SS21中的圆底烧瓶内；

步骤SS23：磁力搅拌24h后，离心收集材料，用超纯水离心清洗三次，得到羧基基团修饰的上转换发光纳米材料，储存备用。