[发明专利]一种利用白酒糟生产屎肠球菌的技术方法

说明书

本发明公开一种利用白酒糟生产屎肠球菌的技术方法，包括将屎肠球菌冻干菌粉进行纯化复壮后接种于一级种子培养液中，摇床培养得一级种子液；然后进一步接种到二级种子培养液中培养获得二级种子液；将制备好的二级种子液接种到含有经预处理的白酒糟的固态发酵培养基中，发酵培养；发酵结束后，将发酵产物烘干粉碎得屎肠球菌固态发酵产品。所得固态发酵产品中，每克干物质的菌种数量达到180亿以上，低温存放12个月后活菌率仍然在80％以上。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种利用白酒糟生产屎肠球菌的技术方法。

背景技术

屎肠球菌是我国农业部允许使用的16种可直接饲喂的饲料微生物品种之一。屎肠球菌作为乳酸菌家族成员之一，在提高幼年畜禽体增重率、提高动物免疫力、调节肠道微生态平衡，提高营养吸收、减少腹泻率、降低死亡率等方面均有很好的效果，加之其对部分抗生素也具备很好的耐受性。因此，在目前的微生态制剂产业特别是饲料添加剂企业中，是深受众多厂家亲睐的一类乳酸菌产品。市场上常见的屎肠球菌是以液态发酵所得，产品活菌数虽高但由于此类产品售价较高、易失活、保存条件苛刻，从而极大制约其产品在市场推广应用。

我国的白酒酿造行业每年产生的丢糟产量在3500万吨以上，这些鲜白酒糟酸度大，水分含量60％以上，并且含有10％左右的粗脂肪、17％左右的粗蛋白、25％左右的粗纤维、B族维生素以及磷、钾等无机元素。此外，白酒糟中还存在由微生物菌体产生的氨基酸、核糖核酸及嘌呤等微量有效成分，这些都是谷物所不能比拟的。若未及时加以处理，酒糟容易腐败变质，这不仅造成资源大量浪费，还会严重污染周围环境。

发明内容

基于上述技术问题，本发明提供一种利用白酒糟生产屎肠球菌的技术方法。以经过预处理的白酒糟作为屎肠球菌的固态培养基，提供一种屎肠球菌固态发酵培养工艺，从而克服现有技术中多以液态发酵制备屎肠球菌所存在的技术问题。

为实现上述技术目的，本发明提供一种利用白酒糟生产屎肠球菌的技术方法，包括以下步骤：

(1)取屎肠球菌冻干菌粉置于改良MRS培养基中，划线培养，挑取3-5个典型屎肠球菌单菌落连续纯化传代复壮3次，选取最优屎肠球菌单菌落，作为一级种子液菌种；

(2)无菌操作挑取筛选的屎肠球菌单菌落接种于一级种子培养液中，摇床培养得一级种子液；然后进一步接种到二级种子培养液中培养获得二级种子液；

(3)将制备好的二级种子液接种到含有经预处理的白酒糟的固态发酵培养基中，发酵培养；

(4)发酵结束后，将发酵产物烘干粉碎得屎肠球菌固态发酵产品。

优选的，以质量份数计，步骤(1)中，MRS培养基包含以下成分：葡萄糖1-2份，蛋白胨0.5-1.5份，牛肉膏0.5-1.5份，酵母浸粉0.2-1份，氯化钠0.2-0.8份，琼脂粉1-3份，碳酸钙0.1-3份，柠檬酸二铵0.1-1份，吐温0.08-0.1份，硫酸镁0.02-0.1份，硫酸锰0.01-0.05份，纯化水85-96份；培养条件为35-37℃。

优选的，以质量份数计，步骤(2)中的一级培养基包含以下组分：蔗糖1-2份，葡萄糖1-2份，蛋白胨0.5-1.5份，碳酸钙1-5份，酵母浸粉0.2-1份，氯化钠0.2-0.8份，牛肉膏0.5-1.5份，硫酸镁0-0.8份，硫酸锰0.1-0.8份，磷酸氢二钾0.8-3.5份，纯化水86-95份；

二级培养基包含以下组分：蔗糖2-3份，葡萄糖0-1.5份，蛋白胨0.5-1.5份，碳酸钙1-5份，酵母浸粉0.2-1份，氯化钠0.2-0.8份，牛肉膏0.5-1.5份，硫酸镁0-0.8份，硫酸锰0.1-0.8份，磷酸氢二钾0.8-3.5份，纯化水86-95份；

一级种子液接种至二级培养基的接种量为5-10％；

培养条件为30-40℃，制备一级种子液的培养时间为8-12h，制备二级种子液的培养时间为12-24h。