[发明专利]一种筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株的方法及其应用

权利要求书

1.一种筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸发酵菌株的方法，其特征在于，包括下述步骤：

S1：从受到噬菌体侵染的缬氨酸生产菌发酵液中分离出噬菌体溶液；

S2：将缬氨酸生产菌和步骤S1制得的噬菌体溶液进行混合培养，对培养液进行分离和纯化处理，获得单菌落；

S3：将步骤S2获得的单菌落和缬氨酸生产菌依次接种到发酵培养基中进行发酵培养，筛选获得具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株。

2.根据权利要求1所述的筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸发酵菌株的方法，其特征在于，所述缬氨酸生产菌为：

野生型黄色短杆菌；

或，野生型大肠杆菌；

或，以野生型黄色短杆菌或野生型大肠杆菌为出发菌经过自然突变和/或理化诱变和/或基因重组获得的菌种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述缬氨酸生产菌选自黄色短杆菌(保藏编号：CCTCC NO:M 2019496)、Sval031菌株(保藏编号：CGMCC No.19456)、Sval049菌株(保藏编号：CGMCC No.19457)、Sval065(保藏编号：CGMCC No.19458)菌株中的任一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S1包括下述步骤：

(1-1)取受到噬菌体侵染的缬氨酸生产菌发酵液，在5000-10000rpm下离心10-30分钟，收集上清液；

(1-2)按照1-5％的接种量向LB半固体培养基中转入上清液和发酵种子液，混合均匀后，将所得混合溶液倒入LB固体培养基上，在30-40℃条件下培养20-40小时，获得噬菌斑；

(1-3)用灭菌生理盐水冲刷LB固体培养基平板，收集流出液，过滤，收集滤液，所得滤液即为噬菌体溶液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S2包括下述步骤：

(2-1)发酵种子液按1-5％的接种量、噬菌体溶液按0.1-1％的接种量依次转入LB液体培养基中，在30-40℃条件下培养18-24小时后，在5000-10000rpm下离心10-30分钟，收集底部滤渣；

(2-2)将步骤(2-1)收集的底部滤渣和步骤(1-3)制得的噬菌体溶液按0.1-1％的接种量转入LB液体培养基中，在30-40℃条件下培养12-36小时后，在5000-10000rpm下离心10-30分钟，收集底部滤渣；

(2-3)将步骤(2-2)收集的底部滤渣和步骤(1-3)制得的噬菌体溶液按0.1-1％的接种量转入LB液体培养基中，在30-40℃条件下培养12-36小时后，收集培养液；

(2-4)将步骤(2-3)收集的培养液进行梯度稀释，取所得的稀释菌液涂布到LB固体培养基上，在30-40℃条件下培养20-40小时，获得单菌落。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤S3包括下述步骤：

(3-1)将步骤(2-4)制得的单菌落接种到LB液体培养基中，在30-40℃条件下培养15-25h，获得OD≥2的培养液，即为单菌落种子液；

(3-2)按5-10％的接种量将步骤(3-1)制得的单菌落种子培养液接种到发酵培养基中培养5-90小时，至发酵液的OD值无下降趋势，从培养液中分离出的菌株，即为具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述发酵种子液按照下述步骤制备得到：将缬氨酸生产菌按5‰-10‰接种量接种于LB液体培养基中，在30-40℃、150-250rpm条件下培养20-40小时，至培养液的OD≥2时，收集培养液，即得发酵种子液。

8.一种根据权利要求1-7任一项所述方法筛选出来的具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株。