[发明专利]一种筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株的筛选方法，包括如下步骤；S1：从受到噬菌体侵染的缬氨酸生产菌发酵液中分离出噬菌体溶液；S2：将步骤S1制得的噬菌体溶液进行纯化培养，获得单菌落；S3：将步骤S2获得的单菌落和缬氨酸生产菌依次接种到发酵培养基中进行发酵培养，筛选获得具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株。该方法具有操作简单、筛选效率高、适用于工业化生产等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株的方法及其应用。

背景技术

缬氨酸为机体必需氨基酸和营养物质，被广泛应用于食品、医药、化妆品、饲料等领域，被广泛用作食品添加剂、饲料添加剂、营养增补剂、风味剂、化妆品添加剂、药物(如抗生素、除草剂等)的制备前体等方面，市场需求巨大。

微生物发酵法生产缬氨酸具有生物基原料、高效率转化、反应温和、环保经济等优点，而被行业广泛运用。但微生物易受到噬菌体感染而影响微生物的发酵效率和发酵产品纯度，进而导致发酵产率低、发酵周期延长、产物积累量减少、发酵产生的杂酸增多、增加发酵产品的纯化及三废回收处理的难度，甚至由此导致发酵失败，致使发酵质量难以获得保证、发酵的资源利用率低、发酵成本居高不下等缺陷。

已有的抗噬菌体污染措施包括控制感染源、菌株轮换、使用药物抑制剂等，但这些措施依然无法有效解决微生物菌株感染、发酵不良等技术难题。为此，如何高效筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸发酵菌株成为本领域急需解决的技术难题。

中国专利申请(CN202010401422.5、CN202010466347.0、CN202010460035.9、CN202010522549.2)公开的内容为本发明必不可少的组成部分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种筛选具有抗噬菌体能力的缬氨酸发酵菌株的方法，包括下述步骤：

S1：从受到噬菌体侵染的缬氨酸生产菌发酵液中分离出噬菌体溶液；

S2：将缬氨酸生产菌和步骤S1制得的噬菌体溶液进行混合培养，对培养液进行分离和纯化处理，获得单菌落；

S3：将步骤S2获得的单菌落和缬氨酸生产菌依次接种到发酵培养基中进行发酵培养，筛选获得具有抗噬菌体能力的缬氨酸生产菌株。

本发明优选的技术方案中，所述缬氨酸生产菌为：

野生型黄色短杆菌；

或，野生型大肠杆菌；

或，以野生型黄色短杆菌或野生型大肠杆菌为出发菌经过自然突变和/或理化诱变和/或基因重组获得的菌种。

本发明优选的技术方案中，所述缬氨酸生产菌为黄色短杆菌(保藏编号：CCTCCNO:M 2019496)，于2019年7月1日提交保藏，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

本发明优选的技术方案中，所述缬氨酸生产菌为Sval031菌株、Sval049菌株、Sval065菌株中的任一种；

其中，所述Sval031菌株(保藏编号：CGMCC No.19456)于2020年3月6日提交保藏，分类命名：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

其中，所述Sval049菌株(保藏编号：CGMCC No.19457)于2020年3月6日提交保藏，分类命名：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；