[发明专利]pH响应型基于共包载抗原和光敏剂的介孔硅纳米粒的治疗性疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种pH响应型基于共包载抗原和光敏剂的介孔硅纳米粒的治疗性疫苗的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1：称取25 mg介孔硅纳米粒子于5 mL 2 M的碳酸氢铵溶液中，在冰浴条件下，用3 mm探头、功率为30%的超声波细胞破碎仪超声5 min，超声5 s停3 s，得到纳米粒溶液，继续置于4 ℃震荡孵育过夜，时间＞10h，然后15000 rpm离心10 min，并用去离子水洗涤两次，收集沉淀；

S2：上述沉淀用1 mL Tris-HCl溶液重悬，所述Tris-HCl溶液的浓度为10mM、pH为8.5，然后在震荡条件下，加入4 mL含25 mg盐酸多巴胺的Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液的浓度为10mM、pH为8.5，避光条件下继续震荡6 h以上，再15000 rpm离心10 min，并用去离子水洗涤两次，收集沉淀；

S3：将5 mg OVA溶解于5 mL含5 mM EDTA的PBS中，所述PBS的浓度为0.1 M、pH为8.0，然后加入25倍摩尔过量的Traut’s试剂，在室温下震荡反应1 h，反应完成后溶液经Zeba脱盐离心柱过滤，得到巯基化的OVA溶液；

S4：S2步骤中的沉淀用1 mL Tris-HCl溶液重悬，所述Tris-HCl溶液的浓度为10mM、pH为8.5，然后在震荡条件下，加入S3步骤中的巯基化OVA溶液和2 mg TCEP，避光条件下继续震荡6 h以上，再15000 rpm离心10 min，并用去离子水洗涤两次，收集沉淀，得到pH响应型基于共包载抗原和光敏剂的介孔硅纳米粒的治疗性疫苗。