[发明专利]真菌核酸提取裂解液及提取核酸的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种真菌核酸提取裂解液，以达到简单快速提取样品中真菌核酸的目的。具体的，本发明提供一种真菌核酸提取裂解液，包括以下组分和用量：1～5mM的氢氧化钠；40‑70mM的Tris‑HCl；200‑400mM异硫氰酸胍；150～300mM NaCl；30～80mM十二烷基硫酸钠；pH调节剂及溶剂；所述pH调节剂调节所述裂解液的pH为7～8。本发明的细胞裂解液成分极其简单，但是DNA提取效果能达到一般试剂盒的水平，使得DNA提取的成本大幅降低。本发明细胞裂解方法操作快速简便，提取时间短，重复性强。且本发明的裂解液可以简单快速的提取真菌的核酸，减少污染，具有省时、省力的优势，在微生物检验领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种真菌核酸提取裂解液、制备方法及应用。

背景技术

核酸提取方法包括传统的苯酚-氯仿法、盐析法、滤膜离心柱法等。传统的核酸提取法各有其优缺点，但提取效果欠佳。当前主流的核酸提取方法有硅胶膜吸附柱法、抗DNA单克隆抗体的免疫亲和法、自动化平台广泛应用的磁珠法核酸提取方法等等。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸提取是指利用物理、化学等方法将核酸从样品中分离出来的过程。分离得到高质量的核酸是分子生物学研究的关键步骤。目前，主要采用核酸提取试剂盒进行核酸提取。然而，传统的核酸提取试剂盒提取的核酸质量较差，不能满足实际需求。

近几年来，细菌或是真菌的变异快，品种多，用普通的培养以及药敏已经很难完全准确的鉴定出其型别。所以核酸检测成为目前能够精确判断型别的可靠便利手段，核酸检测的前提条件是提取足够且质量可以的DNA或RNA，而对于这个要求的前提条件是细菌和真菌的细胞壁需要充分破裂，使得核酸充分释放出来，从而有利于进一步实验。

苯酚-氯仿方法是提取核酸的经典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。酚-氯仿方法经典、便宜，用的都是实验室常用试剂，提纯效率和纯度都很高，但缺点是费时费力，苯酚和氯仿还有一定毒性。

另外，目前市场上的DNA提取试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上，洗涤去除杂质后，再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。这些DNA提取试剂盒价格高，成分比较复杂，且步骤多，而且不能在第一步通过煮沸使细菌灭活，增加了感染的危险性。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种真菌核酸提取裂解液，以达到简单快速提取样品中真菌核酸的目的。

具体的，本发明提供一种真菌核酸提取裂解液，包括以下组分和用量：

1～5mM的氢氧化钠；

40-70mM的Tris-HCl；

200-400mM异硫氰酸胍；

150～300mM NaCl；

30～80mM十二烷基硫酸钠；

pH调节剂及溶剂；所述pH调节剂调节所述裂解液的pH为7～8。

进一步的，所述pH调节剂为磷酸盐缓冲液。

一步的，所述溶剂为水。

进一步的，所述NaCl的浓度为200～250mM。

进一步的，所述异硫氰酸胍的浓度为250～350mM。

本发明还提供一种微生物病原体裂解试剂盒，所述试剂盒包括：上述所述的裂解液；以及至少一个容纳所述裂解液的容器。

本发明还提供一种真菌快速裂解提取核酸的方法，所述方法包括步骤：