[发明专利]一种新型微生物核酸纯化工艺

说明书

本发明公开了一种新型微生物核酸纯化工艺，以达到操作简单、提取率高、纯度高的目的。本发明使用的磁珠微粒为硅羟基磁珠能够更好的分离纯化核酸，磁珠与本发明的其他纯化试剂相互作用明显提高核酸的纯化效率并且纯度高，使分离纯化得率可达接近98％，明显高于现有技术。本发明在实施过程中在DNA结合液中加入1％的十二烷基硫酸钠，明显提高了纯化效果。本发明在实施过程中严格控制磁珠结合液的组分，以及各组分的浓度，并分别使用两种洗涤液对核酸进行分层洗涤纯化，提高了纯化效率，本发明控制样品与DNA结合液的体积比，使其能够更好的纯化分离更小片段的核酸，并能达到对微量浓度样品的高度纯化，达到更好的纯化效果。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种新型微生物核酸纯化工艺。

背景技术

各种形式的核酸应用于各个领域。例如，在重组核酸技术领域中，需要将核酸以探针、基因组核酸和质粒核酸的形式使用。此外，在诊断学领域中，核酸以各种形式应用于各种目的。例如，在检测和诊断人类病原体时，常常使用核酸探针。同样，核酸也用于检测遗传性病症。核酸还用于检测食品污染物。此外，基于从绘制基因图谱到克隆和重组表达的各种原因，也常常用核酸对所关心的核酸进行定位、识别和分离。在许多情况下，只有极微量的核酸可以利用，因此分离和纯化过程费时费力。这些费时费力的操作有时可能会导致核酸损失。在从来自于血清、尿和细菌培养物的样品中纯化核酸时，还会碰到污染和假阳性结果的问题。关于广为人知的分离和纯化方法，有这样一种方法，其中：将核酸吸附到二氧化硅、二氧化硅聚合物(silica polymer)、硅酸镁或类似的固相上，随后通过实施洗涤、解吸附和类似的操作对核酸进行分离和纯化，该方法具有优异的分离性能，但是，该方法在方便性、快速性和自动化适应性方面还存在不足。

现有技术中核酸纯化方法主要包括两个步骤：一是裂解，将细胞破碎使核酸释放出来，裂解步骤是核酸纯化的关键环节，裂解过程主要是将细胞破碎，释放出核酸；二是纯化，即量释放出来的核酸和细胞内的其他成分如蛋白质、盐和其他杂质分离开。目前使用广泛的核酸分离纯化方法包括酚-氯仿抽提法和离心柱纯化，该方法具有不环保，操作复杂，难以实现多通量等缺点。因此开发一种能够有效提高分离纯化效率，提高核酸回收率以及纯度的纯化试剂尤为重要。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种新型微生物核酸纯化工艺，以达到操作简单、提取率高、纯度高的目的。

具体的，本发明一种新型微生物核酸纯化工艺包括以下步骤：

S1：磁珠预处理：将硅羟基磁珠微粒摇匀，吸入离心管中，磁分离，弃上清，得到预处理的硅羟基磁珠微粒；

S2：混合：吸取DNA结合液和样本加入步骤S1得到的预处理后的硅羟基磁珠微粒中，超声混匀后静置，磁分离，弃上清，得到物质A；

S3：取第一纯化剂加入所述步骤S2得到的物质A中，超声混匀后静置，磁分离，弃上清，得到物质B，重复此步骤一次，得到物质C；

S4：取第二纯化剂加入步骤S3得到的物质C中，超声混匀后静置，磁分离，弃上清，得到物质D，重复此步骤一次，得到物质E；

S5：取洗脱液缓慢加入步骤S4得到的物质E中，静置，保持磁力吸附，弃上清，得到物质F；

S6：取洗脱液加入步骤S5得到的物质F中，超声混匀，静置后再超声混匀，磁力吸附，吸取上清液溶解冻干beads进行荧光PCR检测。

进一步的，所述步骤S1中，所述的磁珠为硅羟基修饰的磁珠浓度为20-30mg/mL，所述的磁珠的粒径为300-800nm。

进一步的，所述步骤S2中DNA结合液和样品的体积比为60：40。

进一步的，所述步骤S2～S4以及S6中超声条件为40～60w，超声5～10min。