[发明专利]高含量2-异丙基苹果酸在松花粉真实性评价中的应用

说明书

本发明涉及食品检测领域，具体涉及高含量2‑异丙基苹果酸在松花粉真实性评价中的应用。同时，本发明提出了一种松花粉真实性评价方法，以2‑异丙基苹果酸为特征化合物，当其含量介于18‑35 mg/kg时，可将样品判定为松花粉；反之，则判定为其它花粉或者掺假松花粉。本发明提供的方法简单、高效，且稳定性强，适于准确测定松花粉中2‑异丙基苹果酸含量。此发明适用于松花粉真实性与纯度评价，对保护消费者的合法权益和维护松花粉行业的健康发展具有重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，具体涉及高含量2-异丙基苹果酸在松花粉真实性评价中的应用。

背景技术

松花粉是松科植物马尾松、油松等植物产生的花粉，经采摘、干燥、除杂等步骤获得一种天然食品和保健品，广泛应用于食品保健、护肤美容和外伤治疗等领域。具体而言，松花粉中含有丰富的多种多样蛋白、碳水化合物、矿物、核苷酸、黄酮类、单糖、多糖等，能够全面补充、均衡人体所需的营养，因此，深受人们（尤其是老年人群）喜爱，在食品或保健品中有很好的应用。同时，由于松花粉具有一定的护肤、止血收敛等功效，在女性美容、婴儿护肤和外伤医治等方面也有广泛应用。但是，目前松花粉产量有限，市场缺口较大，其售价较高，通常是其它花粉的数倍以上，如油菜花粉、茶花粉等。部分不良商家为了追逐高额利润，往往在松花粉中掺入淀粉或其它品种花粉等进行掺假售假，这不仅损害了消费者的权益，而且阻碍了松花粉行业的健康有序发展。当前，我国尚未制定有关松花粉真实性与纯度评价方法，而如何评价松花粉的真实性与纯度已经成为广大松花粉从业者和消费者公认的亟需解决的问题。

松花粉同其它类型的花粉一样，都是植物雄蕊产生的配子，其中含有丰富的内源性化合物。由于不同品种花粉中内源性物质存在较大种类和含量差异，其中部分化合物仅存在于某一类植物花粉中，或者其含量显著区别与其它品种花粉。对于这样化合物，通常将其称之为特征性或指示性物质，用于花粉的真实性或纯度评价。本发明拟采用液相串联质谱等技术开展松花粉中内源性物质的识别与鉴定研究，旨在发掘出其特征性物质，进而用于松花粉的真实性与纯度评价。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明首先通过液相色谱串联高分辨质谱的正负模式对大量真实松花粉与其他常见花粉进行扫描分析，发现松花粉在负模式下共同存在一个丰度较高的色谱峰，出峰时间为5.60 min (见图2，其中A图为LC-HRMS检测松花粉的总离子流色谱图(TIC)，B图为LC-HRMS检测松花粉中2-异丙基苹果酸的提取离子流色谱图(EIC))，显著区别于其他常见花粉。该物质的精确质量数为m/z 175.06120，其主要碎片含有 m/z115.03852 (见图3，其中A图为松花粉中化合物m/z 175的Full Mass图，B图为松花粉中化合物m/z 175的MS/MS质谱图)。基于高分辨质谱提供的精确质量数，获得该物质的元素组成为C₇H₁₂O₅，与主要碎片m/z 115.03832相比，元素组成中减少了C₂H₄O₂，并猜测该化合物的可能碎裂过程(见图4)。基于上述分析，可知该物质的元素组成为C₇H₁₂O₅，主要构成为C₅H₈O₃与C₅H₉O。并基于高分辨质谱获得的精确质量数的MS/MS图谱，采用Compound Discoverer 2.0软件，在m/z Cloud、Chem Bank, m/z Vault等数据库中进行多重化学物质数据库检索。基于上述数据，初步将化合物鉴定为2-异丙基苹果酸(其化学结构见图1)。为了进一步确认该化合物，发明人购买了20 mg的2-异丙基苹果酸标准品。通过对比验证，进一步明确了该化合物为2-异丙基苹果酸。