[发明专利]用于表达荧光蛋白的肉葡萄球菌质粒及其构建方法和应用

权利要求书

1.用于表达单体红色荧光蛋白的肉葡萄球菌穿梭质粒pBT2，其特征在于荧光蛋白的编码基因拥有启动子与信号肽的控制。其中所述启动子为ufA基因的启动子Peftu片段(GenBank Accession No：7551602)，其中所述信号肽为来自肉葡基因组中的铁离子依赖型的过氧化物酶(FepB or EfeB，Sca2214)中的Tat片段(GenBank Accession No：AM295250)，其中所述来源于S.hyicus subsp.hyicus DSM20459的脂肪酶基因shl的启动子Sec片段(GenBank Accession No：LS483304.1)，其中所述单体红色荧光蛋白为DsRed-Monomer(GenBank Accession No：AB711114.1)。所述穿梭质粒分别命名为pBT2-E-DsRed-M、pBT2-E-Tat-DsRed-M和pBT2-E-Sec-DsRed-M。所表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3。

2.一种菌株，所述菌株包含权利要求1所述的穿梭质粒。

3.根据权利要求2所属菌株，其中最优菌株为肉葡萄球菌TM300。

4.一种如权利要求1所述的表达质粒的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)片段启动子Peftu片段、信号肽Tat片段、信号肽Sec片段和DsRed-Monomer片段的PCR扩增、回收。

(2)对以上片段进行双酶切。

(3)将双酶切产物与载体pBT2依次连接，分别构建质粒pBT2-E-DsRed-M、pBT2-E-Tat-DsRed-M和pBT2-E-Sec-DsRed-M。

5.根据权利要求3所述用途，将所述构建质粒应用于表达荧光蛋白的肉葡萄球菌，应用于实时观察、活体检测。