[发明专利]检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫试剂盒，包括捕获抗体包被的酶联反应板和酶标记检测抗体；捕获抗体和检测抗体均为与狂犬病毒糖蛋白抗原特异性结合的单克隆抗体RV1；所述与狂犬病毒糖蛋白抗原特异性结合的单克隆抗体含有重链可变区RV1-V_H和轻链可变区RV1-V_L；所述RV1-V_H和RV1-V_L均由决定簇互补区和框架区组成；所述RV1-V_H和所述RV1-V_L的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述RV1-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第31~36位氨基酸所示；所述RV1-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ IDNo.1的第51~66位氨基酸所示；所述RV1-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第99~105位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第24~40位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第56~62位氨基酸所示；所述RV1-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第95~103位氨基酸所示。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述RV1-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1~116位所示；其RV1-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1~113位所示。

3.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括抗原标准品，所述抗原标准品为狂犬病毒糖蛋白抗原。

4.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板的获得方法是将所述捕获抗体溶于pH 9.6的碳酸盐溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板，每孔50ng~1000ng捕获抗体，2~8℃下放置8~12小时，使捕获抗体与酶联反应板充分结合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液，37℃封闭处理2~3小时，甩干后，待酶联反应板干燥后4℃密封保存。

5.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括底物液A、底物液B和终止液；所述底物液A为含0.6mg/ml过氧化氢尿素的柠檬酸磷酸盐缓冲液，所述底物液B为0.2mg/ml的四甲基联苯胺溶液，使用时两者以1:1的比例混合；所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。

6.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样品稀释液和20倍浓缩洗涤液；样品稀释液为含有5mg/ml酪蛋白的0.01M、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；20倍浓缩洗涤液为含有浓度为0.8％~1.2％的Tween-20的0.01M，pH 值为7.4的磷酸盐缓冲液。

7.权利要求1-6中任意一项所述的酶联免疫试剂盒在特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，待测样品为疫苗生产过程中的培养液、灭活液、纯化液、浓缩液或破乳后的成品疫苗。