[发明专利]检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫试剂盒及其应用。该试剂盒包括作为捕获抗体包被的酶联反应板和酶标抗体的单克隆抗体。所述单克隆抗体重链可变区：CDR1如序列1的第31～36位氨基酸所示；CDR2如序列1的第51～66位氨基酸所示；CDR3如序列1的第99～105位氨基酸所示；轻链可变区：CDR1如序列2的第24～40位氨基酸所示；CDR2如序列2的第56～62位氨基酸所示；CDR3如序列2的第95～103位氨基酸所示。采用狂犬病毒的特异性单克隆抗体制成的酶联免疫定量检测试剂盒，灵敏度高、特异性强，可以有效地区分并检测样品中狂犬病毒糖蛋白抗原的含量。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫检测试剂盒，适用于狂犬病毒糖蛋白抗原的特异、快速、准确检测。

背景技术

狂犬病毒是弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)的成员。根据对狂犬病毒N蛋白单克隆抗体以及G蛋白系列的分析和鉴定，全球各地的狂犬病毒主要分成4个血清型。其中血清1型即为人们所熟知的地理分布最广、对世界人民健康威胁最大的狂犬病毒，包括野病毒和固定毒实验室株(如SAD)。随着现代分子生物学的研究进展，参照狂犬病毒核蛋白(N protein)基因N端500个核苷酸的相似率，狂犬病毒属被分成7种基因型，基因型2～6只在欧洲和非洲发现。

狂犬病毒为不分节段的单股负链RNA病毒，其基因组总长度约1,2000nt，主要编码五种已知的结构蛋白：核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)和依赖RNA的RNA多聚酶(L)。在狂犬病毒感染过程中，人和动物机体既可以产生细胞免疫应答又可以产生体液免疫应答。主要侵害神经细胞、T淋巴细胞为主的淋巴细胞，但对B淋巴细胞影响较小。在此过程中，病毒免疫除了与G蛋白有关外，现在逐步发现与N蛋白和P蛋白也与病毒免疫相关。N基因长度为1350-1353nt，编码N蛋白(Nucleoprotien)，主要负责包装病毒基因组RNA。由于N基因的含量丰富，并且其编码的N蛋白易于被荧光抗体方法检测，所以N基因和N蛋白在抗原诊断及进化分析中应用最广泛的。

目前测定狂犬病毒糖蛋白抗原的方法主要免疫荧光法、RT-PCR核酸检测法、病毒分离的方法主要包括细胞培养分离和乳鼠接种法分离，由于以上检测方法都必须在P2或P3实验室中完成，并且上述方法也必须专业的实验人员和设备才能够完成，且耗时较长，根本无法满足大范围的快速诊断需求，因而，需要开发一种操作便捷，特异，灵敏、准确、可靠的狂犬病毒糖蛋白抗原检测方法。

目前，酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA)是市场上主流的免疫测定技术，已广泛应用于临床检测，快速便捷且灵敏度高，且不需要特殊的仪器设备。伴随着单克隆抗体技术的发展，各种病原的抗原检测方法得到了前所未有的发展，由于单克隆抗体是针对抗原上单一表位筛选制备的抗体，因此能够敏感特异地识别狂犬病毒糖蛋白抗原，为基于单克隆抗体技术的狂犬病毒糖蛋白抗原检测方法奠定了基础，目前还未检索到有关狂犬病抗原定量检测的酶联免疫吸附试验的检测方法，因此本发明具有独创性和新颖性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原的酶联免疫试剂盒，该试剂盒利用一株可以与狂犬病毒糖蛋白抗原特异性结合的单克隆抗体RV1作为捕获抗体及检测抗体，建立了一种特异性、敏感性和重复性好的狂犬病毒糖蛋白抗原检测方法，用于检测疫苗生产过程中的培养液、灭活液、纯化液、浓缩液和破乳后的成品疫苗等中的狂犬病毒糖蛋白抗原含量。

基于上述目的，本发明的特异性定量检测狂犬病毒糖蛋白抗原酶联免疫试剂盒，包括以捕获抗体包被的酶联反应板和酶标检测抗体。所述酶标检测抗体优选为经辣根化物酶标记抗体，所述辣根过氧化物酶可通过戊二醛法或过碘酸法交联在检测抗体上。捕获抗体和检测抗体均为与狂犬病毒糖蛋白抗原特异性结合的单克隆抗体RV1。