[发明专利]一种塞内卡病毒猪源单克隆基因工程抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种塞内卡病毒猪源单克隆基因工程抗体及其制备方法和应用，属于单克隆抗体制备技术领域。本发明提供的塞内卡病毒猪源单克隆基因工程抗体的制备方法，从感染和免疫SVA抗原的猪外周血中，利用单个B细胞抗体技术，获得SVA抗体IgG基因序列，并在真核细胞中表达和组装，获得SVA特异性猪源单克隆基因工程抗体，然后利用ELISA、病毒中和实验和免疫荧光实验验证筛选出SVA高亲和力的特异性猪源单克隆基因工程抗体，对研究SVA宿主特异性抗原位点的鉴定提供了重要方法，也为该病毒的新型疫苗设计和诊断方法的建立提供了关键技术材料。

技术领域

本发明属于单克隆抗体制备技术领域，具体涉及一种塞内卡病毒猪源单克隆基因工程抗体及其制备方法和应用。

背景技术

塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是小RNA病毒科塞内卡病毒属的唯一成员。该病毒感染可引起猪的鼻镜和蹄冠出现水疱、溃烂、跛行甚至死亡(新生仔猪致死率高达(30％～70％)^[1]，临床上与其它水疱病如口蹄疫病毒、猪水泡病毒、水泡性口炎病毒、猪水疱疹病毒难以区分，已对养猪业的生产和经济效益具有重大的潜在威胁。目前，美国、加拿大、巴西、泰国、中国、越南等多个国家局部暴发了SVA疫情，且各国之间的流行毒株同源性极高^[2,3]，有些毒株已发生了重组和变异^[4]。因此，许多国家都监视本病的发生和发展，加紧开发防治技术产品。

目前，SVA的病原学检测主要依赖RT-PCR方法或者实时荧光定量RT-PCR方法，血清学仍然使用传统的间接ELISA或者竞争ELISA方法、中和试验以及间接免疫荧光试验。随着养殖业的快速发展，需要简便快速的病原学检测方法，尽管各种PCR方法在病原检测中发挥了重大作用，但PCR方法需要特殊的空间和设备，数小时后才能初步判定结果，确诊还需基因序列的测定，所以病原学的快速诊断试剂已成为猪产业的重大需求之一。血清学方法主要用于监测病原感染或者疫苗免疫后的抗体水平，但是随着SVA新毒株的不断出现，利用SVA的多克隆抗体建立的间接ELISA方法敏感性和特异性相对较差，假阳性较多，鼠源单克隆抗体也存在不能识别的毒株，可能是SVA鼠源抗体和本动物源的抗体所识别的抗原表位存在差异，致使建立的ELSIA方法容易漏检变异毒株的感染血清。

参考文献

[1]F.A.Vannucci1,D.C.L.Linhares2,D.E.S.N.Barcellos3,H.C.Lam1,J.Collins1 and D.Marthaler1，Identification and Complete Genome of SenecaValley Virus in Vesicular Fluid and Sera of Pigs Affected with IdiopathicVesicular Disease,Brazil[J].Transboundary and Emerging Diseases,2015,62:589–593.

[2]Hao Wang,Chenxia Niu,Zuorong Nong,Dongqun Quan,Ying Chen,OuyangKang,Weijian Huang,Zuzhang Wei.Emergence and phylogenetic analysis of a novelSeneca Valley virus strain in the Guangxi Province of China[J].Research inveterinary science,2020,130:207-211.

[3]Z.Zhu,F.Yang,P.Chen,H.Liu,W.Cao,K.Zhang,X.Liu,H.Zheng.Emergence ofnovel Seneca Valley virus strains in China,2017[J].Transbound Emerg Dis.2017:1–6.