[发明专利]一种脱氢表雄酮多克隆抗体及其制备方法、铂纳米花探针和脱氢表雄酮酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种脱氢表雄酮多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：采用碳二亚胺法将脱氢表雄酮与牛血清蛋白进行偶联，得到免疫原；

步骤2：使用免疫原免疫兔子，取血离心，取上清即为脱氢表雄酮多克隆抗体。

2.一种脱氢表雄酮多克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的制备方法制得。

3.一种铂纳米花探针，其特征在于，包括：铂纳米花和与所述铂纳米花静电结合的权利要求2所述的脱氢表雄酮多克隆抗体。

4.权利要求3所述的铂纳米花探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将聚乙烯比咯烷酮和甘氨酸加入水中，再加入H₂PtCl₆·6H₂O混合，进行水热反应，得到铂纳米花；

步骤2：将所述铂纳米花的水溶液、碱溶液与脱氢表雄酮多克隆抗体进行混合，加入封闭液进行封闭，得到铂纳米花探针。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述聚乙烯比咯烷酮、甘氨酸和H₂PtCl₆·6H₂O的质量体积比为(400～405)mg：(75～80)mg：1.0mL；

所述H₂PtCl₆·6H₂O的浓度为40mM；

步骤1所述水热反应的温度为180～200℃，时间为6～7h。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述铂纳米花水溶液：碱溶液：脱氢表雄酮多克隆抗体：封闭液的体积比为1000：6：2：100；

所述铂纳米花水溶液的浓度为1mg/mL；所述碱溶液的浓度为1mg/mL，所述封闭液的浓度为100mg/mL。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述混合采用搅拌的方式进行混合，所述搅拌的温度为室温，时间为1～2h；

所述加入封闭液后采用搅拌的方式进行混合，所述搅拌的温度为室温，时间为1～2h。

8.一种脱氢表雄酮酶联免疫试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的铂纳米花探针。

9.一种利用权利要求8所述的脱氢表雄酮酶联免疫试剂盒检测脱氢表雄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将所述铂纳米探针与不同浓度的脱氢表雄酮标准样品进行酶联免疫反应，将检测信号与脱氢表雄酮浓度建立标准曲线；

步骤2：将所述铂纳米探针与未知浓度的脱氢表雄酮的待测样品进行酶联免疫反应，根据步骤1所述的标准曲线，确定所述待测样品的浓度。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤1具体为：

在酶标板上采用脱氢表雄酮包被抗原包被，然后将铂纳米探针与不同浓度的脱氢表雄酮标准溶液分别混合，然后加入包被后的酶标板中进行反应，再加入显色液进行显色反应，终止显色反应后，测量OD450，建立吸光值与脱氢表雄酮的标准曲线。