[发明专利]一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖的制备方法

说明书

本发明提供一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖的制备方法，该方法将鼠李糖乳杆菌接种于脱脂乳培养基发酵，然后经沸水浴离心除菌体，三氯乙酸除蛋白，乙醇沉淀，真空冷冻干燥，制备鼠李糖乳杆菌胞外多糖。该方法胞外多糖产量为625mg/L。在不改变多糖物理和化学性质及营养成分的基础上，通过利用蒸发浓缩的方法，大大降低了三氯乙酸及乙醇的用量，并提高了除蛋白和沉淀多糖的效率。该方法获得的胞外多糖具有抗氧化活性，对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基有清除能力，对亚铁离子具有螯合能力。

技术领域

本发明涉及乳酸菌胞外多糖领域，具体涉及一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖的制备方法。

背景技术

乳酸菌是可以发酵碳水化合物并产生大量乳酸的微生物的总称。主要包括：乳酸杆菌属，双歧杆菌属，乳酸乳球菌属和链球菌属。由于其在食品生产中的安全使用历史悠久，所以通常被认为是安全的微生物(GRAS)。在机体内，LAB除了可以调节肠道菌群，促进肠道蠕动，保护肠道生态平衡，改善肠道功能外，还能提高机体免疫能力，抑制腐败菌滋生等。胞外多糖是乳酸菌在其生长和代谢过程中产生和分泌的水溶性长链多糖，分子量介于4.0×10⁴～6.0×10⁶u之间。乳酸菌产生的胞外多糖具有多种潜在的生物活性，包括抗氧化、抗炎、调节肠道菌群、抗肿瘤、免疫调节和抗菌等。

在正常情况下，体内活性氧物质是有氧代谢的副产物，其中包括羟基自由基，超氧阴离子和过氧化氢等，活性氧物质的产生和消除维持着氧化-抗氧化平衡，并在调节信号通路的传导和细胞增殖中起着重要作用。当平衡被破坏时，活性氧物质水平升高，导致自由基的产生，这些自由基可能对蛋白质、脂质和DNA造成有害影响,致使机体产生氧化应激反应，引起细胞氧化损伤并发展为多系统疾病。虽然人工合成的抗氧化剂能够有效减缓氧化过程，但它们也会对机体产生很多副作用，因此，天然物质中的安全抗氧化剂越来越多受到重视。胞外多糖具有高抗氧化活性和低细胞毒性，因此受到了研究人员的广泛关注。现有的鼠李糖乳杆菌培养发酵胞外多糖的方法产量低，无法达到胞外多糖在生产中的应用。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖的制备方法，解决现有的鼠李糖乳杆菌培养发酵胞外多糖的方法产量低的问题，该方法胞外多糖产量为625mg/L。

1、本发明所述的胞外多糖制备方法，具体操作按以下步骤进行：一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将鼠李糖乳杆菌接种于含葡萄糖的脱脂乳液体培养基中，在恒温培养箱静置发酵；

(2)、将发酵好的培养基进行沸水浴，使其中菌体和酶失活，蛋白质变性，取出冷却至室温，低温离心取上清液；

(3)、对上清液蒸发浓缩至原体积的1/3，得到第一次浓缩液，然后加入质量浓度80％的三氯乙酸到第一次浓缩液中，三氯乙酸最终质量浓度为4％，静置使蛋白质充分沉淀，低温离心取上清液；

(4)、对上清液蒸发浓缩至原体积的1/3，得到第二次浓缩液，然后加入预冷的质量浓度95％乙醇，乙醇与第二次浓缩液体积比3:1，静置使多糖充分沉淀，然后低温离心弃上清液取沉淀；

(5)、将沉淀转移至透析袋在4℃环境中用去离子水透析3天，每隔12小时换一次水；

(6)、将透析好的胞外多糖进行真空冷冻干燥，最终得到白色絮状物即为粗多糖。

本发明还具有如下特征：

1、鼠李糖乳杆菌的接种量为3％。

2、步骤(1)中，脱脂乳液体培养基每升含有：脱脂奶粉100g和葡萄糖10g。

3、步骤(1)中，静置发酵为在37℃、36小时静置发酵。

4、步骤(2)和(3)中，低温离心条件为：4℃，10000×g离心15分钟。