[发明专利]一种无血清细胞冻存液、制备方法及其使用方法

权利要求书

1.一种无血清细胞冻存液，其特征在于，包括如下组份：

聚乙二醇4～6g/100mL，海藻糖0.5～2.5g/100mL，葡萄糖2～3g/100mL，全反式维甲酸0.5～1.5mg/100mL及少量抗坏血酸0.5mg/100ml，溶剂为无血清基础培养基，最终PH为6.8～7.4。

2.如权利要求1所述的一种无血清细胞冻存液的制备方法，其特征在于，具体配置方法包括如下步骤(以100ml为例)：

S01、称取5g上述浓度的聚乙二醇溶解于80ml基础培养基中；

S02、加入2g上述浓度的海藻糖，搅拌使其溶解；

S03、加入2.5g上述浓度的葡萄糖，搅拌使其溶解；

S04、加入1mg上述浓度的全反式维甲酸，搅拌使其溶解；

S05、加入0.5mg抗坏血酸，搅拌使其溶解；

S06、将配置好的细胞冻存液通过1mol/L的盐酸或NaOH调节PH至7.2，最后用基础培养基定容至100ml，于2-8℃保存。

3.如权利要求1所述的一种无血清细胞冻存液的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

T01、消化：将培养汇合度为75％～85％的细胞取出，清洗；使用胰酶进行消化，离心弃废液，保留沉淀；加入冻存液，重悬得细胞悬液，细胞液浓度约为1×10⁶个/mL；

T02、冻存：将上述细胞悬液放入-80℃后，隔天放置于液氮保存；

T03、复苏：将冻存的细胞，放置于37±0.5℃下解冻，离心，保留沉淀，加入完全培养基重悬，接种，培养。