[发明专利]一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A）制备模板引物库，所述模板引物库为随机模板引物的集合，每一模板引物的3’端被磷酸化修饰，所述随机模板引物的长度为6bp-9bp，所述模板引物库中的随机模板引物的数量为4^m，m为随机模板引物的长度，所述模板引物库中的随机模板引物以预设规则置于模板引物孔板的矩阵小孔中；

B）制备起始引物库，所述起始引物库为随机起始引物的集合，每一起始引物固定在固相载体上，所述随机起始引物的长度为6bp-9bp，所述起始引物库中的随机起始引物的数量为4ⁿ，n为随机起始引物的长度，所述起始引物库中的随机起始引物以预设规则置于起始引物孔板的矩阵小孔中；

C）根据待合成寡聚脱氧核糖核苷酸的序列在起始引物库中选择对应的起始引物，随后依次在模板引物库中选择对应的模板引物并进行单个碱基的延伸反应，以在起始引物的3’端合成下个碱基，直至合成完整的寡聚脱氧核糖核苷酸；

所述寡聚脱氧核糖核苷酸的长度为200-500bp。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相载体为磁珠。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一个碱基的延伸反应体系为：10×DNA聚合酶 Buffer 1μL，起始引物 1μL，模板引物 1μL，可逆终止dNTP 1μL，DNA聚合酶 1μL，加ddH₂O至总体积为10μL。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第二个碱基及其后续单个碱基的延伸反应体系为：10×DNA 聚合酶 Buffer 1μL，上一延伸反应产物 1μL，模板引物 1μL，可逆终止dNTP 1μL，DNA聚合酶 0.5μL，加ddH₂O至总体积为10μL。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述起始引物的母液浓度为0.05-0.15μM；所述模板引物的母液浓度为8-12μM；所述可逆终止dNTP的母液浓度为20-30mM；所述DNA聚合酶的浓度为1-5U/μL。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述起始引物的母液浓度为0.1μM；所述模板引物的母液浓度为10μM；所述可逆终止dNTP的母液浓度为25mM；所述DNA聚合酶的浓度为2U/μL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述延伸反应的条件为：94℃变性30s，20-40℃退火30s，72℃延伸30s。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在每一碱基的延伸反应中，延伸反应重复进行3-5次。

9.一种合成寡聚脱氧核糖核苷酸的试剂盒，其特征在于，包括：

模板引物孔板，其装载有模板引物库，所述模板引物库为随机模板引物的集合，每一模板引物的3’端被磷酸化修饰；所述模板引物库中的随机模板引物的数量为4^m，m为随机模板引物的长度，所述模板引物库中的随机模板引物以预设规则置于模板引物孔板的矩阵小孔中；

起始引物孔板，其装载有起始引物库，所述起始引物库为随机起始引物的集合，每一起始引物固定在固相载体上；所述起始引物库中的随机起始引物的数量为4ⁿ，n为随机起始引物的长度，所述起始引物库中的随机起始引物以预设规则置于起始引物孔板的矩阵小孔中；

所述随机模板引物的长度为6bp-9bp；所述随机起始引物的长度为6bp-9bp；

所述寡聚脱氧核糖核苷酸的长度为200-500 bp。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为磁珠。

11. 根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括10×DNA 聚合酶 Buffer、可逆终止dNTP、DNA聚合酶和ddH₂O中的至少一种。