[发明专利]一种酿酒酵母菌菌株产色醇的方法

说明书

本发明公开一种酿酒酵母菌菌株产色醇的方法，用酿酒酵母菌KMLY1‑2发酵生产色醇，在发酵培养基中经12～72h的发酵，发酵液中的色醇浓度达到0.052～0.633g/L；所述酿酒酵母菌KMLY1‑2，拉丁文学名：Saccharomyces cerevisiae KMLY1‑2，已于2018年7月6日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2018457。本发明为研究色醇的工业化制备提供了新的理论依据，且生产的色醇安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性产品，被广泛的应用于食品、纺织、医药等行业。本发明能高效地生产色醇，适于进行工业化生产的研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种酿酒酵母菌菌株产色醇的方法。

背景技术

色醇(Tryptophol，简称TOL)，又称3-(2-羟乙基)吲哚，2-(3-吲哚基)乙醇，3-吲哚乙醇，β-吲哚乙醇，吲哚-3-乙醇，色醇3-(2-羟乙基)吲哚或β-吲哚基乙醇，是一种具有多种功效的吲哚衍生物，广泛存在于葡萄酒和啤酒等饮料中。研究发现TOL具有促进人们睡眠，抑制病原真菌生长，同时，色醇可作为第一类精神药物二甲基色胺(DMT)和吲哚拉明(Indoramin)的合成原料。

研究发现微生物具有色醇合成能力。1958年，KaperVeldstar分离到的根瘤农杆菌转化色氨酸可产生色醇，随后发现，木醋杆菌、蜡样芽孢杆菌、畸形外囊菌等细菌也均能产生色醇。Yue et al.将festucae在12L发酵培养基中培养4周后提取获得色醇5mg。Furukawa et al.报道的立枯丝核菌MAFF305219产生色醇的最大浓度为60ng/mL。综上，虽然许多种微生物可以合成色醇，但产量过低限制了其工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一株高产色醇的酿酒酵母菌菌株及其利用该菌株生产色醇的方法，为工业化大规模发酵法生产色醇提供新途径。

本发明提供一种酿酒酵母菌菌株产色醇的方法，用酿酒酵母菌KMLY1-2发酵生产色醇，在发酵培养基中经12～72h的发酵，发酵液中的色醇浓度达到0.052～0.633g/L；

所述酿酒酵母菌KMLY1-2，拉丁文学名：Saccharomyces cerevisiae KMLY1-2，已于2018年7月6日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2018457。

优选地，基于质量百分比，发酵培养基包括以下组分：葡萄糖0～10wt％，磷酸氢二钾0.1～1wt％，七水硫酸镁0.05wt％，氯化钠0.1wt％，色氨酸0.02～0.3wt％，余量为水，pH3～6。

用所述产色醇的菌株发酵生产色醇的方法，采用酿酒酵母KMLY1-2为出发菌株，经种子培养和发酵培养。具体步骤如下：

1、在培养有酿酒酵母菌KMLY1-2的YPD固体培养基平板上挑取酿酒酵母菌KMLY1-2菌体接种至YPD液体培养基中，在温度为25～30℃，转速为150～200rpm的摇床上培养10～16h，得到种子培养物。更优选地，种子培养物的培养条件为：温度30℃，转速200rpm，发酵培养时间12h。

2、将所述的种子培养物以体积百分比为1～10％的接种量接种至发酵培养基中，在温度为25～40℃，转速为50～200rpm的摇床上发酵培养12～72h，得到发酵液。更优选地，发酵培养条件为：温度30℃，转速200rpm，发酵培养时间24h。

3、将所述的发酵液经低温离心后除去菌体，收集上清液，将上清液用水稀释4-5倍，之后将稀释液用滤膜过滤，得到富含色醇的样品，采用HPLC测定样品中色醇含量，经测定样品中色醇的最高含量为0.633g/L。

以上所述的YPD固体培养基的组成为：蛋白胨2wt％，酵母粉1wt％，葡萄糖2wt％，琼脂1.5wt％，余量为水；YPD液体培养基包括以下组分：蛋白胨2wt％，酵母粉1wt％，葡萄糖2wt％，余量为水。