[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统构建TAP基因缺失的猪T2细胞的方法

权利要求书

1.一种敲除猪TAP2基因的sgRNA，其特征在于，包括TAP2-sgRNA-1，所述的TAP2-sgRNA-1的序列如下：

TAP2-sgRNA-1olige1：5′-caccGGAGGGCATCTTGCGACT-3′；

TAP2-sgRNA-1olige2：5′-aaacAGTCGCAAGATGCCCTCC-3′；

二者退火形成双链。

2.一种敲除猪TAP1基因的sgRNA，其特征在于，包括TAP1-sgRNA-1或TAP1-sgRNA-2，

所述的TAP1-sgRNA-1的序列如下：

TAP1-sgRNA-1olige1：5′-caccGTTAGAGCTGAGCTGCTT-3′；

TAP1-sgRNA-1olige2：5′-aaacAAGCAGCTCAGCTCTAAC-3′；

二者退火形成双链；

所述的TAP1-sgRNA-2的序列如下：

TAP1-sgRNA-2olige1：5′-caccGGAGAGGAGAGATGGGC-3′；

TAP1-sgRNA-2olige2：5′-aaacGCCCATCTCTCCTCTCC-3′；

二者退火形成双链。

3.权利要求1所述的sgRNA在猪TAP2基因敲除中的应用。

4.权利要求2所述的sgRNA在猪TAP1基因敲除中的应用。

5.利用CRISPR/Cas9系统构建TAP基因缺失的猪T2细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)分别构建权利要求1或2所述的sgRNA；

(2)敲除TAP2基因：将权利要求1所述的TAP2-sgRNA-1连接到pUC57-sgRNA载体上，转化TOP10感受态细胞，获得高拷贝的含有靶向识别序列的pUC57-sgRNA质粒；将pUC57-sgRNA质粒和Cas9质粒共转染PK15细胞；

(3)筛选敲除TAP2基因的单克隆细胞系；

(4)利用权利要求2所述的TAP1-sgRNA-1或TAP1-sgRNA-2在TAP2基因敲除的细胞中敲除TAP1基因；

(5)筛选获得TAP2和TAP1双基因敲除的细胞系。