[发明专利]一种t-PAI-C标志物检测试剂盒及其配制方法

说明书

本专利公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，尤其涉及一种t‑PAI‑C标志物检测试剂盒及其配制方法；包括相互独立包装的试剂1、试剂2、磁微粒试剂、校准品1、校准品2，将吖啶酯化学发光技术与免疫磁微粒相结合，使得检测灵敏度、精密性高、检测范围宽，反应时间短经济有效；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现组织型纤溶酶原激活剂‑纤溶酶原激活物抑制剂‑1复合物的高通量快速化测定，性能可靠、灵敏度高、线性范围宽，可配合半自动、全自动仪器使用。

技术领域：

本发明涉及医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，尤其涉及一种t-PAI-C标志物检测试剂盒及其配制方法。

背景技术：

t-PAI-C(组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物)是由血管内皮细胞产生的组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator，t-PA)与生理性抑制因子PAI-11∶1结合形成的复合物，组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物不仅是纤溶系统激活的标志物，也是血管内皮损伤的标志物。冠心病患者机体内，t-PA和PAI-1含量显著失衡，且与疾病的严重程度呈相关性，临床上可通过组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物判断疾病的预后状况。弥散性血管内凝血(DIC)是许多疾病共同发展时凝血功能障碍，后期进展可伴随休克、多器官功能衰竭，病死率极高，目前已知的组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物测定方法较少，主要有放射免疫法(RIA)、胶乳增强免疫比浊法等。但放射免疫法步骤繁琐，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。胶乳增强免疫比浊法操作简单、快速，但是灵敏度低、低值重复性差。因此，有待开发对组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物检测准确度高、灵敏度高、线性范围宽，能降低检测成本的检测试剂盒。

发明内容：

针对现有技术存在的问题本发明的目的是：提供一种准确性高、灵敏度强、线性范围宽的一种t-PAI-C标志物检测试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：应用磁微粒直接化学发光技术，采用双抗体夹心法。制备一种组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物检测试剂盒，包括相互独立包装的试剂1、试剂2、磁微粒试剂、校准品1、校准品2；所述试剂1是由组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物抗体加入缓冲液，经超滤膜超滤后，加入生物素和防腐剂，再加入所述缓冲液使抗体终浓度为1mg/mL，于4℃或室温透析生物素化抗体配制而成，所述试剂2由Tris和氯化钠溶解于水后，加入表面活性剂和防腐剂，再与动物血清白蛋白混合溶解配制而成，所述磁微粒试剂由组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物标记抗体与缓冲液混合超滤稀释，再与吖啶酯混合、培养、纯化、再稀释配制而成，所述校准品1和校准品2皆由组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合物用1％～5％动物血清白蛋白溶液配制成校准品并冻干，赋值而成。

本发明具有如下优点：

1.本发明的双抗体夹心法组织型纤溶酶原激活剂-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物检测试剂盒(磁微粒直接化学发光法)各试剂组分包括试剂1、试剂2、磁微粒试剂、校准品1、校准品2、各组分试剂具有稳定性好，效期可至18个月以上，有效降低成本；

2.检测灵敏度高，特异性能好、线性范围宽；

3.在本发明中，经过大量实验的工艺优化，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量控制规程进行生产；

4.用户仅需按照操作说明进行规范操作，就可得到可靠的结果，操作简便。

具体实施方式：

实施例1:

一种配制t-PAI-C标志物检测试剂盒的方法如下：

1.1、校准品1的配制：