[发明专利]一种流感亚单位疫苗及其制备方法

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体地说，涉及一种流感亚单位疫苗及其制备方法。所述的流感亚单位疫苗由PBD‑b‑PEO/DOTAP和蛋白质抗原组成；所述PBD‑b‑PEO/DOTAP和蛋白质抗原的质量比为100：1‑200：1。本发明提供的流感亚单位疫苗不仅能在抗体水平上提高数十倍，而且由于去除了病毒核蛋白和M2蛋白，安全风险性大大降低。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说，涉及一种流感亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

佐剂是指加入疫苗制剂后能促进、增强或延长机体对抗原特异性免疫应答的物质。佐剂增强免疫应答的机制尚未完全阐明，不同佐剂也不尽相同，但概括而言，可归纳为：一，佐剂和抗原一起进入机体后，可改变抗原的物理性状，形成抗原储存库，有利于抗原的缓释，延长抗原在体内存留的时间；二，被佐剂吸附的抗原更易被吞噬细胞吞噬，促进对抗原的处理，易在局部形成炎症反应；三，刺激淋巴细胞增殖和分化，从而增强和扩大免疫应答的效应；四，增强巨噬细胞和淋巴细胞膜的通透性，促进其对抗原的有效处理和提呈。自从1992年Glenny首次用明矾沉淀白喉类毒素制成抗原免疫豚鼠，取得了较强的免疫效果，铝佐剂已广泛应用于百白破、乙肝等多种疫苗中，并取得了良好的效果，其安全性和有效性得到了公认，成为人用疫苗中使用最广泛的一种佐剂。然而，随着铝佐剂的广泛应用，其不足之处也逐渐暴露。首先铝佐剂不能冻干；制备的凝胶批与批之间差异大，质量难控制且对佐剂的效果很难做出准确的评价；更为重要的是，铝佐剂只能诱导产生体液免疫应答，不能诱导产生细胞免疫应答；还可诱导产生IgE抗体，增加了发生超敏反应的危险。而一个理想的疫苗佐剂应具有以下特点：可增强抗原的免疫原性，特别是一些无免疫原性或弱免疫原性的抗原物质；可增强机体的免疫反应性，特别是那些免疫机能低下人群；能诱导产生高亲和力的抗体的同时，可诱导产生细胞免疫应答；可引起或增强迟发型超敏反应；对机体固有免疫的激活适度，诱导产生较低水平的引起不良反应的炎症因子IL-1、TNF-α等，免疫副反应小。

2，3-二油氧基丙基三甲基氯化铵（DOTAP）是一种常用的阳离子脂质体，由于它与DNA或RNA形成稳定的转染复合物进入细胞，并将核酸释放入细胞内，因此一直作为一种真核细胞转染试剂用于真核细胞的转染和DNA疫苗的载体。近年来的研究发现，DOTAP还是一种很好的免疫调节剂，将多肽或蛋白质抗原与DOTAP包装制备成阳离子脂质体可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力，同时与传统佐剂通过Toll样受体途径激活抗原提呈细胞不同，DOTAP可通过促细胞分裂原活化蛋白激酶（MAP）途径激活抗原提呈细胞，从而诱导特异性的免疫应答。该途径炎症因子释放少，炎症反应低。

申请号为201510599234.7的中国发明专利公开了一种以阳离子脂质体DOTAP为佐剂的疫苗及其制备方法。该疫苗由蛋白质抗原与阳离子脂质体DOTAP制备而成，抗原分子与DOTAP脂质形成0-500nm±的胶束结构，抗原分子包裹在胶束的亲水内核中或镶嵌在胶束膜中。DOTAP作为疫苗佐剂通过与抗原分子形成胶束结构，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的摄取和提呈；同时与传统佐剂通过Toll样受体途径激活抗原提呈细胞不同，DOTAP可通过促细胞分裂原活化蛋白激酶（MAP）途径激活抗原提呈细胞，从而诱导特异性的免疫应答，该途径炎症因子释放少，炎症反应低，因此安全性更好；DOTAP作为疫苗佐剂既可诱导体液免疫应答，又可诱导细胞免疫应答，克服了传统佐剂只能诱导体液免疫应答的缺陷。

然而，上述以阳离子脂质体DOTAP为佐剂的疫苗，一方面在抗体水平方面并未获得明显的提高；另一方面，上述以阳离子脂质体DOTAP为佐剂的疫苗中使用裂解流感疫苗作为抗原，由于裂解疫苗中，并未将非抗原成分（血凝素和神经氨酸酶）以外的杂蛋白如病毒核蛋白和M2蛋白进行去除，这就意味着阳离子脂质体DOTAP佐剂在增强疫苗抗原组分的免疫原性以外，放大了杂蛋白的副反应，从疫苗安全的角度上看，势必存在一定的风险。

发明内容