[发明专利]一种食用菌组织细胞的超薄冷冻切片方法

权利要求书

1.一种食用菌的超薄冷冻切片方法，包括：

1)将食用菌样品于固定液中固定，得到固定好的样品；

2)将所述固定好的样品置于冷冻保护剂中进行预处理，得到预处理的样品，所述冷冻保护剂由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其在所述冷冻保护剂中的浓度分别为5％(质量百分比)海藻糖和10％(体积百分比)甘油；

3)将所述预处理的样品利用冷冻切片组织包埋剂进行包埋，得到包埋好的样品；

4)将所述包埋好的样品进行切片，完成食用菌的超薄冷冻切片。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述预处理通过将所述固定好的样品置于所述冷冻保护剂中抽真空再室温孵育1小时完成。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述固定液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其在所述固定液中的浓度分别为2.5％(体积百分比)戊二醛、0.1MKH₂PO₄和0.1M Na₂HPO₄·12H₂O。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述将食用菌样品于固定液中固定通过将所述食用菌样品置于所述固定液中抽真空再4℃孵育20分钟完成。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤3)中，包埋在-10℃下进行。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述食用菌为丝球小奥德蘑、平菇或香菇。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述食用菌样品为丝球小奥德蘑子实体、平菇子实体、香菇子实体或香菇菌丝体。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：

所述食用菌为丝球小奥德蘑，所述切片厚度为8-12μm；

所述食用菌为平菇，所述切片厚度为6-8μm；

所述食用菌为香菇，所述切片厚度为4-6μm。

9.成套试剂，包括权利要求1中所述冷冻保护剂和/或权利要求3中所述固定液。

10.权利要求9所述成套试剂在食用菌超薄冷冻切片中的应用。