[发明专利]检测多瘤病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体地，涉及多瘤病毒的检测。本发明提供了一种用于检测多瘤病毒并分型的组合物；同时，还提供了包括该组合物的试剂盒，所述组合物的用途，以及用于检测多瘤病毒并分型的方法。本发明的组合物能够使用一个管在一次试验中同时检测这3种病毒并分型，其成本低，通量高，耗时少，灵敏度高，特异性好。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，具体地，涉及多瘤病毒的检测并分型。

背景技术

多瘤病毒（polyomavirus）是一种广泛分布于脊椎动物体内的病毒，该病毒可在很多不同种系的天然宿主范围内传播，具有促使多种类型细胞发生肿瘤变异的能力。因其可诱发小鼠患多发性肿瘤，因此以“多瘤”一词命名此类病毒多瘤病毒属乳多空病毒科病毒，主要包括BK病毒（BK virus，BKV）、JC病毒（JC virus，JCV）和SV40病毒（simian virus40，猿猴空泡病毒40），原发感染大多发生在儿童和青少年时期，一般无临床症状，但可持续潜伏于肾脏和B淋巴细胞中。当机体免疫功能受损或低下时（AIDS患者、移植受者），潜伏的病毒可被激活，引起活动性感染。可能发展为进行性多灶性白质脑（PML）及多瘤病毒相关性肾病（PVAN）。

BK 病毒是一种直径45nm，拥有二十面体衣壳的非包膜双链环状DNA病毒，含5300基本碱基对。BK病毒的全部基因有75%与JC病毒同源，70%与SV40 病毒同源。BK病毒出现在尿液中称为病毒尿症（viruria），出现在血液或血浆中称为病毒血症（virmia）。BK病毒肾病（BKVN）则定义为BK 病毒出现在肾实质中，其伴随证据是肾小管间质性肾炎或爬升的血清肌酐指标，与美国肾移植学组对移植物肾病的定义相一致。BK病毒的治疗不仅是特殊针对肾病的治疗，一些研究学者认为在发现BK病毒血症时便须开始进行干预治疗。所以BK病毒的检测与监控是重要的也是首要措施。

JC病毒最早是从进行性多灶性脑白质病患者的大脑组织中分离出来的，这是一种突胶质细胞中病毒裂解复制引起的脱髓鞘疾病，如进行性多灶性白质脑（PML），见于严重细胞免疫抑制病例，如获得性免疫缺陷综合征。

SV40病毒（猿猴空泡病毒40），是60年代初发现分离的猴肾细胞病毒，它是一种DNA病毒，其在体外可使人及动物多种组织类型正常细胞发生恶性转化，在转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成，并且人类许多肿瘤的发生也与之有关。

同时，也有研究报道称在患脑瘤的病人的脑组织中，大多数都具有三种病毒中至少一种呈阳性的情况，所以，同时检测并区分这三种病毒是有必要的。

目前国内外应用于临床诊断的血清学检测主要是检测抗多瘤病毒的IgG与IgA，检测方法多为酶联免疫吸附法（ELISA）。ELISA技术简单、快速、不需要特定的仪器，但是其灵敏度不高，且存在一定的假阳性。且由于BK病毒/JC病毒/SV40病毒属于长期潜伏感染的病毒，正常人也会携带这些病毒，人抗体90%以上都为阳性，所以血清学的方法并不能有效的判断。

而常规的PCR在应用中由于各种因素影响，如操作不规范，标本质量差，严重交叉污染等，都会造成错误的结果，出现假阳性和假阴性。所以更广泛使用的是荧光定量PCR。

然而，到目前为止，还未出现同时检测BK病毒、JC病毒，和SV40病毒的荧光定量PCR的产品。现行多瘤病毒的检测主要还是以荧光PCR单通道检测，每次只能检测一个靶标，整体检测的通量与便捷性不够。因此，本领域需要同时检测BK病毒、JC病毒，和SV40病毒的产品。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种检测多瘤病毒并分型的组合物，所述组合物包括：

BKV-F1：5'-GGGGACCTAGTTGCCAGTGT-3'（SEQ ID NO:1）；

BKV-R1：5'-GGAGCACCAGCAATTACAGCA-3'（SEQ ID NO:2）；