[发明专利]一种深层土中噬菌体的分离方法

权利要求书

1.一种深层土中噬菌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将土壤样品与悬浮液混合，超声震荡处理，离心，取上清液，制得噬菌体初提液；

(2)将步骤(1)制得的噬菌体初提液经0.22μm的滤膜过滤，制得噬菌体提取液；

(3)将步骤(2)制得的噬菌体提取液经30kd的超滤膜离心过滤，去除滤出液，制得噬菌体浓缩液；

(4)将步骤(3)制得噬菌体浓缩液、宿主菌菌液和缓冲液混合后，35～38℃静置20～28小时，离心，取上清，经0.22μm的滤膜过滤，取滤液，制得噬菌体。

2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中，悬浮液为质量百分比浓度为1％的柠檬酸钾缓冲液；进一步优选的，所述所述柠檬酸钾缓冲液每升组份如下：

10g柠檬酸钾、1.44g Na₂PO₄、0.24g KHPO₄，pH 7.0，定溶至1升。

3.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中，土壤样品与悬浮液的质量体积比为1:1，单位g/ml。

4.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中，超声震荡为在0℃、100W、20kHz的条件下处理3min，每超声处理1min翻转震荡30秒。

5.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中，离心为在4℃、9000g离心15min。

6.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(3)中，离心为在4℃、5000g离心15min。

7.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(4)中，噬菌体浓缩液：宿主菌菌液：缓冲液的体积比为1：(8～12)：(45～55)。

8.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(4)中，宿主菌菌液中宿主菌菌体浓度为OD₆₀₀＝0.8。

9.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(4)中，缓冲液为成分如下：

Tris–HCl 50mM，NaCl 150mM，MgCl₂ 10mM，CaCl₂ 2mM，pH＝7.5。

10.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述步骤(4)中，离心为在4℃、9000g离心15min。