[发明专利]MiR-205-5p在制备血管新生剂中的应用

说明书

本发明涉及血管生产抑制技术领域，公开了一种MiR‑205‑5p在制备血管新生剂中的应用，该应用是为以下操作：采用定量实时qRT‑PCR检测miR‑205‑5p和CD31在人胃癌组织和肝转移瘤中的表达；通过体外检测人脐静脉内皮细胞毛细血管的形成和在体背侧皮肤皱褶室模型，研究miR‑205‑5p沉默和高表达的作用；采用qRT‑PCR和western印迹检测miR‑205‑5p对VEGFA和FGF1表达的影响，MiR‑205‑5p通过ERK信号途径和直接靶向性下调VEGFA和FGF1的表达。本发明利用MiR‑205‑5p通过ERK信号途径和直接靶向性下调VEGFA和FGF1的表达，从而抑制胃癌血管生成，尤其是血管生成中发挥了重要作用，利用miR‑205‑5p可能通过负调控VEGFA表达来降低新生血管的形成，因此miR‑205‑5p是胃癌中通过抑制血管生成的抑癌因子，在不同类型肿瘤的增殖和侵袭中也起重要作用。

技术领域

本发明涉及血管生成抑制技术领域，具体是一种MiR-205-5p在制备血管新生剂中的应用。

背景技术

胃癌(GC)是第五常见的癌症，是全球第三大癌症死亡原因。几乎三分之二的胃癌病例发生在发展中国家。随着术后辅助治疗的引入，胃癌患者的预后有了很大的改善。然而，转移性和/或不可切除性胃癌患者的中位总生存期(OS)小于12个月[3]，PD-1和HER2靶向治疗在胃癌治疗中显示出良好的效果，但能从靶向治疗中获益的患者比例仍然非常有限。肿瘤血管生成在胃癌的生长、侵袭和转移扩散中起着重要作用，抗血管生成治疗是临床肿瘤学中最重要、最有前途的治疗方法之一；

因此，调控血管生成的信号分子成为当前研究的热点，血管生成本身不是一个活跃的过程，它受一些血管生成因子和一些血管生成抑制剂的控制，但是miR-205-5p调节胃癌新生血管的能力尚不清楚，所以，本领域技术人员提供了一种MiR-205-5p在制备血管新生剂中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种MiR-205-5p在制备血管新生剂中的应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种MiR-205-5p在制备血管新生剂中的应用，该应用是为以下操作：

S1、采用定量实时qRT-PCR检测miR-205-5p和CD31在人胃癌组织和肝转移瘤中的表达；

S2、通过体外检测人脐静脉内皮细胞毛细血管的形成和在体背侧皮肤皱褶室模型，研究miR-205-5p沉默和高表达的作用；

S3、采用qRT-PCR和western印迹检测miR-205-5p对VEGFA和FGF1表达的影响，MiR-205-5p通过ERK信号途径和直接靶向性下调VEGFA和FGF1的表达。

作为本发明进一步的方案：为了进一步确定miR-205-5p表达对体内血管生成的影响，采用不同类型的GC细胞克隆建立了异种移植模型，并采用免疫组化方法检测肝转移瘤和异种移植瘤的微血管密度，其中异种移植模型可采用小老鼠模型。

作为本发明再进一步的方案：所述S3中是采用双荧光素酶报告法证实FGF1的3'UTR 与VEGFA的相互作用，且双荧光素酶报告法显示miR-205-5p可直接靶向VEGFA和FGF1mRNA 的3'UTR，调控内源性VEGFA和FGF1的表达，所以VEGFA和FGF1是miR-205-5p的直接靶点，miR-205-5p可以通过靶向ERK信号通路和miRNA-mRNA直接相互作用调控内源性VEGFA和FGF1的表达。

作为本发明再进一步的方案：所述S2中人脐静脉内皮细胞毛细血管的形成是指将基质凝胶用管道输送到预冷96孔板中，将人脐静脉内皮细胞培养在100微升条件培养基中，条件培养基取自不同种类的细胞，培养36小时后，拍摄毛细血管形成结构；