[发明专利]一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法

说明书

本发明提供一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法，涉及生物医学技术领域。该胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法，包括载玻片，所述载玻片通过方形阵列的方式分为多个微型阵列区域，每个所述微型阵列区域的内部均附着有羧基磁珠。该胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法，通过在载玻片上附着有羧基磁珠，同时通过羧基磁珠与胶体金标记抗体进行交联，从而使得羧基磁珠的内部包含有胶体金标记抗体，将羧基磁珠与胶体金标记抗体交联后，点样在每个微型阵列区域，从而会使得每个微型阵列区域的内部都包含有胶体金标记抗体，在使用上，可以有效的提高了胸腹水癌细胞检测精度。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别的为一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法。

背景技术

对胸腹水中癌细胞进行病理诊断是长期困扰病理学家的一个难题，特别是当胸腹水中间皮细胞增生明显时，在形态上常常与分化良好的癌细胞非常相似，极易混淆，给病理诊断带来了很大的困难，即使是具有丰富临床经验的病理学家也有可能出现误诊，这也是目前国际细胞病理学界的一个难题。

对于胸腹水中间皮细胞与癌细胞的鉴别，以往最为有效的解决方法是通过免疫组化染色区分间皮细胞和癌细胞。但是现有技术中，由于细胞涂片不象组织切片那样具有可复制性，每一张细胞涂片上面的细胞成分及分布都不尽相同，因此不能保证每一张涂片上都有癌细胞，从而在检测上会导致检测的不够精确，同时现有的一些抗体，无法长时间的吸附在载玻片上，在使用上，会无法对抗体进行精确的使用，降低检测精度。

发明内容

本发明提供的发明目的在于提供一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片及其制备方法，该解决上述背景技术中的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片，包括载玻片，所述载玻片通过方形阵列的方式分为多个微型阵列区域，每个所述微型阵列区域的内部均附着有羧基磁珠，所述羧基磁珠的内部交联有胶体金标记的抗肿瘤抗原特异性抗体。

一种胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片的制备方法，包括有如下步骤：

S1、胶体金制备：取1g氯金酸溶于50ml的水中，形成0.01％的氯金酸水溶液，取100mL至250mL烧杯中，加热至沸腾后，保持沸腾的状态下加入2.00～3.00ml的0.1mol/L柠檬酸钠，当氯金酸水溶液的颜色为稳定的红色后停止加热，待红色水溶液冷却至室温后，用100ml～200ml的蒸馏水恢复至原体积，即可得到胶体金。

S2、胶体金标记抗体：将待标记蛋白质置入透析袋内后直接放入双蒸馏水中透析，然后在4℃的环境下离心60分钟，取上清液。

S3、使用EDCNHS两步法的羧基磁珠与胶体金标记抗体交联：利用胶体金标记抗体缓冲液用200ml～250ml蒸馏水分馏置换并调整浓度，将胶体金标记抗体缓冲液置换为15mMMES 6.0，将胶体金标记抗体浓度调整至2mg/mL～2.5mg/mL。

S4、在已准备好的载玻片上点样：对羧基磁珠与胶体金标记抗体胶交联后的样品进行点样，在每个微型阵列区域进行点样，点好的芯片经水化烘干后用PBS冲洗，烘干温度在80°～90°，烘干时间为10min～15min，再用1％的BSA封闭1小时，PBS冲洗，将载玻片放入盛有PBS玻璃染色缸中，浸泡5min～7min即可，吹干后即制得胸腹水癌细胞快速检测蛋白芯片。

进一步的，将根据S3中的操作步骤，通过光电比色法确定标记蛋白最适稳定量为30～60μg/ml，形成蛋白质溶液，调节胶体金pH至6.0～6.5，在胶体金中加入最适稳定量的蛋白质溶液，然后对溶液进行离心，离心后形成沉淀物，将沉淀物溶于PEG 2000缓冲液中，制成胶体金标记抗体。

进一步的，根据S3之后，还包括以下步骤：