[发明专利]一种产反式乌头酸的基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202010867102.9 | 申请日： | 2020-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN112011470B | 公开（公告）日： | 2022-07-05 |
| 发明（设计）人： | 吕雪峰;耿策;黄雪年;王敏;靳志刚;曹海峰;郭强;李继彬 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所;山东鲁抗舍里乐药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/53;C12N15/10;C12P7/48;C12R1/66 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 反式 乌头 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种产反式乌头酸的基因工程菌株，其特征在于，所述的基因工程菌株是以无顺式乌头酸脱羧酶CadA表达的土曲霉菌株（
2.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述的顺式乌头酸脱羧酶CadA在NCBI的登录号是 GenBank：EAU29420.1。
3.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，构建所述出发菌株的宿主菌为土曲霉CICC40205，土曲霉NRRL1960，土曲霉DSM23081，土曲霉TN484或土曲霉TN484-M1。
4.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，编码所述的细胞色素P450单加氧酶的基因为CICC_3028g，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.权利要求1-4任一项所述的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，所述的构建方法是将顺式乌头酸脱羧酶CadA进行基因缺失突变而获得的土曲霉，然后将获得的土曲霉中的细胞色素P450单加氧酶基因进行敲除，构建重组土曲霉。
6.根据权利要求5所述的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，所述的构建方法具体步骤包括：
1) 细胞色素P450单加氧酶基因打靶元件构建：以土曲霉CICC40205的基因组为模板，PCR扩增获得细胞色素P450单加氧酶基因CICC_3028g基因的上游同源臂片段与下游同源臂片段，作为打靶元件；
2) 将步骤1）中得到的CICC_3028g打靶元件导入无顺式乌头酸脱羧酶CadA表达的土曲霉，筛选后获得产反式乌头酸的基因工程菌株。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤1）中扩增CICC_3028g基因的上游同源臂片段的引物为U-3028g-F：-5’-CGACGGCCAGTGAATTCGAGctggtgggatatgctgggtttagtct-3’和U-3028g-R：5’-ctttacgcttgcgatcccgaagtcttcggaagacggcca-3’；扩增CICC_3028g基因的下游同源臂片段的引物为D-3028g-F：5’-gaggtaaccttctttccgatatcatcgaagactgct-3’和D-3028g-R ：5’-agatgtgcggcagatcagatccatcg-3’。
8.权利要求1-4任意一项所述的基因工程菌株在生产反式乌头酸中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院青岛生物能源与过程研究所;山东鲁抗舍里乐药业有限公司，未经中国科学院青岛生物能源与过程研究所;山东鲁抗舍里乐药业有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010867102.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
