[发明专利]检验SLC可以维持成年睾丸中Leydig和肌样细胞体内稳态的方法

说明书

本发明公开了一种检验SLC可以维持成年睾丸中Leydig和肌样细胞体内稳态的方法。成年SD大鼠睾丸生精小管相关的干细胞，称为Leydig干细胞(SLC)，能够在体外和体内分化为Leydig细胞。SLC的增殖和分化受局部产生的因子调节，包括PDGF家族成员PDGF‑AA和PDGF‑BB。两个成员都能够刺激SLC的增殖，而只有PDGF‑AA能够刺激SLC分化为产生睾酮素(T)的Leydig细胞，而PDGF‑BB则抑制该过程。在本方法中，验证了SLC实际上在不同分化条件下，能够形成Leydig细胞或肌样细胞。PDGF‑AA+LH可以让SLC分化为产生T的Leydig细胞，PDGF‑BB+TGFB则诱导细胞成为表达平滑肌肌动蛋白的类肌细胞。本方法有效验证了生精小管相关干细胞(SLC)的多能性，并且检验了SLC在体内维持Leydig和Myoid群体的体内稳态的重要作用。

技术领域

本发明涉及生物化学试验技术领域，具体是一种检验SLC可以维持成年睾丸中Leydig和肌样细胞体内稳态的方法。

背景技术

哺乳动物的睾丸既有生殖细胞，又有体细胞。生殖细胞群体产生精子，而体细胞群体会产生雄性激素睾酮(T)并为精子的产生提供支持。间质Leydig细胞和生精小管周围的肌样myoid细胞是睾丸的两个重要组成部分。睾丸间质细胞的主要功能是产生T，这对于维持睾丸的精子产生和机体的雄性性别特征至关重要。Leydig细胞发育或维持的缺陷可能会导致雄性激素缺乏症(性腺功能减退)，从而影响个体的生殖功能以及个体身心健康。性腺机能减退与许多生理和心理变化有关，包括身体瘦弱、骨密度低、肌肉质量和力量下降以性欲下降，并且还会引发腹部肥胖、心血管疾病、情绪低迷等情况。然而，肌样myoid细胞是位于生精小管周围的一组平滑肌细胞，它们为生精小管结构提供物理支持，并通过其可收缩性帮助小管腔内精子的运动。肌样细胞的雄性激素受体表达，已被证明对睾丸功能至关重要，现有研究证实肌细胞特异性雄性激素受体的敲除会导致精子发育产生严重缺陷。另外，肌样细胞可能通过产生调节因子如GDNF来影响精子产生，成年Leydig细胞来自未分化的干Leydig细胞(SLC)，具有广泛的自我更新能力以及分化为雄性激素生成细胞的能力。大量研究已经确定，成年睾丸中存在干细胞。这些细胞主要存在于生精小管的表面或血管的周围。我们还发现了许多可能在SLC的增殖和/或分化中起重要作用的局部因素。但是关于肌样细胞，到目前为止，关于成年睾丸中它们的来源及其前体细胞的信息很少。同样，还不清楚肌样细胞在成年睾丸中被替代的频率，以及是否存在能主动维持肌样细胞体内稳态的干细胞。血小板源性生长因子(PDGF)已被证实参与ALCs和肌样细胞的发育。PDGFA和PDGFB在大鼠睾丸中均有表达，都可以二聚形成PDGF-AA和PDGF-BB。PDGF同二聚体与其相应的酪氨酸激酶受体PDGFRα和PDGFRβ结合，从而形成独特的分子功能。睾丸间质细胞和肌样细胞是睾丸PDGF局部作用的潜在靶标。在产前和产后睾丸发育期间，主要表达PDGF和PDGF反应的细胞分别为Sertoli和Leydig/myoid细胞。新生和成年睾丸的SLCs也表达PDGFRα和PDGFRβ。然而，这两种受体及其配体似乎在睾丸间质细胞和肌细胞的发育中起着独特的作用。并且PDGFA或PDGFR α信号的破坏会阻止成年Leydig细胞的形成，这可能是前体细胞无法分化为Leydig细胞的结果。由于PDGF-AA和PDGF-BB在生精小管相关干细胞的增殖和分化中发挥了独特的作用，其中PDGF-AA能够刺激SLC的增殖及其向Leydig细胞的分化，而PDGF-BB刺激SLC 的增殖但抑制其向Leydig谱系的分化。但是目前无法验证SLC可能实际上是多能的假说，它可以形成Leydig或肌样谱系，具体取决于局部调节因素，包括PDGF配体。通过研究认为在生精小管表面可能存在能够形成Leydig-或Myoid-cells的共同前体细胞。这种多能干细胞在维持成年睾丸中两个体细胞(Leydig和myoid)群体的稳态中可能发挥重要作用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检验SLC可以维持成年睾丸中Leydig和肌样细胞体内稳态的方法。该方法操作简单，可以有效证明SLC可以同时维持成年睾丸中2种(Leydig和肌样)细胞的体内稳态。