[发明专利]顺铂耐药肺癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途有效
申请号: | 202010873808.6 | 申请日: | 2020-08-26 |
公开(公告)号: | CN112080471B | 公开(公告)日: | 2021-07-09 |
发明(设计)人: | 孙志坚;李程;肖金平;康平 | 申请(专利权)人: | 北京科途医学科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/09 | 分类号: | C12N5/09;C12Q1/02 |
代理公司: | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人: | 耿超 |
地址: | 100176 北京市大兴区经*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 耐药 肺癌 器官 及其 培养 方法 培养基 用途 | ||
1.一种培养顺铂耐药肺癌类器官的方法,其特征在于,该方法包括:
将顺铂耐药肺癌组织细胞与培养基和基质胶混合,得到待培养物,其中,所述培养基中含有基质金属蛋白酶-10,以所述培养基为基准,所述基质金属蛋白酶-10的浓度为50~200nM;所述培养基中还含有Advanced DMEM/F 12培养基、FBS、青链霉素、Noggin、FGF7、B27、Nicotinamide和EGF;
对所述待培养物进行培养扩增,得到顺铂耐药肺癌类器官;
其中,所述顺铂耐药肺癌组织细胞由顺铂耐药肺癌原生组织经酶解处理得到,
将所述顺铂耐药肺癌原生组织与Ⅰ型胶原酶混合,得到第一预混物;
将所述第一预混物中的顺铂耐药肺癌原生组织切割为糜状,得到第二预混物;
将所述第二预混物与酶解液混合,得到待酶解物;
其中,所述酶解液中含有顺铂,以所述酶解液为基准,所述顺铂的浓度为26~100μM;所述酶解液中还含有Ⅰ型胶原酶,其中,以所述酶解液为基准,所述Ⅰ型胶原酶的浓度为1mg/mL~5mg/mL;
将所述待酶解物进行培养酶解1~2h,得到酶解产物;
对所述酶解产物进行分离处理,得到所述顺铂耐药肺癌组织细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述待培养物中,所述顺铂耐药肺癌组织细胞的浓度为1×104~5×104个/mL,所述基质胶的含量为1~20体积%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,以所述培养基为基准,所述FBS的含量为5~10体积%,所述青链霉素的浓度为50~100μg/ml,所述Noggin的浓度为50~150ng/ml,所述FGF7的浓度为1~10ng/ml,所述B27的含量为1~5体积%,所述Nicotinamide的浓度为1~10mM,所述EGF的浓度为1~10ng/ml,余量为所述Advanced DMEM/F 12培养基。
4.一种用于顺铂耐药肺癌类器官培养的培养基,其特征在于,所述培养基中含有基质金属蛋白酶-10,以所述培养基为基准,所述基质金属蛋白酶-10的浓度为50~200nM;
所述培养基中还含有Advanced DMEM/F 12培养基、FBS、青链霉素、Noggin、FGF7、B27、Nicotinamide和EGF。
5.根据权利要求4所述的一种用于顺铂耐药肺癌类器官培养的培养基,其特征在于,以所述培养基为基准,所述FBS的含量为5~10体积%,所述青链霉素的浓度为50~100μg/ml,所述Noggin的浓度为50~150ng/ml,所述FGF7的浓度为1~10ng/ml,所述B27的含量为1~5体积%,所述Nicotinamide的浓度为1~10mM,所述EGF的浓度为1~10ng/ml,余量为所述Advanced DMEM/F 12培养基。
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